cck8

linlin532775462

请教各位师兄，师姐，具体怎么用cck8来检测细胞增殖呢，最后绘制生长曲线呢，每个孔都有加cck-8吗，空白对照怎么设呢，谢谢各位前辈了
& ^5 D& {4 r, x，

johnkye

8 ^% Y; r" n4 B& X2 \& E: V0 o, [- {- `; Y, f, N
1. 在96孔板中接种细胞悬液(100 ul /孔)，通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞，细胞毒性实验每孔7 z# t; t! i6 ]' D1 m
约5000个细胞，具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。
+ G5 o/ z4 Q$ Q/ x/ f6 O2. 按照实验需要，进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激，处理一段适当的时间(例如: 6,12, 24或48
4 ]! n% K  z! ]4 ?' H6 o8 B小时)。8 d, Y% k9 N8 F2 h5 p! V
3. 每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加入20ul CCK-8溶液，以此类推。可
3 N; h5 U9 y# S5 B以用加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照，若担心所使用的药物会干扰检3 i& Z' a& P; X' s0 o: L
测，需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空白对照。
0 f1 U4 M# _' g4. 在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5、1、2和4小$ ~& s0 v3 \" `3 w* c
时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
1 T! `& F& o% v3 w2 j5. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光值，若无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。如果样品
" Z+ t+ |3 D7 W, X% w% i! v; D% w' W为高浑浊度的细胞悬液，可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。3 j3 e+ Q# Y3 u6 d( p  A
6. 如果需要暂时不测定O.D值，可以向每孔中加入10ul 0.1M HCl溶液或者1% w/v的SDS溶液，避光保7 e% q# X" \' q5 D4 q. N  {
存在室温，24小时内吸光度不会发生变化。1 n- ^% f) n5 i$ J4 y6 G! f, T

18605313076

这个和MTT检测原理差不多，只不过比MTT更为方便，不用加DMSO溶解。而且也适合悬浮细胞。空白对照组：就是不加细胞，只含培养基的组。同时你还要设置阴性对照组：只加细胞不加药物的组。具体的说明书网上都有，你可以参考看看。

如醉如痴的

回复 johnkye 的帖子! m( J& S& p# U' y

) K" m0 V  }0 W- d- j0 g* z您好，我想问一下，那个特定药物刺激，是什么药物呢