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回复 luoermei11 的帖子 ^4 L: X+ g7 D* @) H
% h$ @. e3 G! j耗材:1把有齿镊、1把眼科镊、大小剪刀各一把、4个100mm培养皿
0 z4 O; ?( M: }% ]2 w, J试剂:清洗液(1×双抗的生理盐水)、基础培养基 A. E6 Y5 k& W- M7 t7 a5 M
方法:8 _! V) _' n M+ ?3 i( F
1.将脐带放入培养皿中,反复清洗,除干净里面的血液;/ |2 }- F5 u4 b# V) U
2.将脐带放入一干净的加入基础培养基的培养皿中,剪成1.5cm的小段,沿静脉剖开;2 w0 t/ K' N( y+ K# {9 }4 b& R
3.剥干净静脉、动脉,用有齿镊剥离华通胶;9 i9 M! C, _) j! B9 v
4.将剥离的华通胶转入50ml离心管中,用大的剪刀将其剪成1-4mm2大小的块状,加生理盐水清洗几遍,出去里面的透明质酸(粘稠物); V( O$ r5 j% H# f7 g6 G/ t
5.将组织块与完全培养基1:4混匀,接种,一般T75的瓶子加5ml即可;
1 V/ u( v$ v) K I6.每隔2天换液,换液2清洗组织块2遍,6-8天会有细胞爬出,如果细胞爬出注意换液时不要晃动组织块;# l6 ^& {1 w" E% h% U4 B8 f
7.待组织块爬出的细胞量比较大时,传代,以后正常培养。 |
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