人脐带植块培养清洗换液的问题

xuyang0317

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: s& J3 G  l3 D; {3 `) n, a9 a8 x4 M5 Y
1.将脐带去血后用pbs洗2次后尽量去水后再剪碎，洗涤后水分较大，不利于组织块贴壁；
5 |! t( Y& P- d: N2.细胞能不能爬出来，我个人觉得最大原因是个人体质的原因（分离了2年的脐带经验），其次就是和您使用的培养液有关系，跟你有没有洗涤没有多少关系；
# ~( C$ K4 B5 L; D9 W3.组织块贴壁放入培养箱3-5小时后，直接加入含10%的FBS和EGF培养液，放置3天后观察有没有污染，没污染的话6天左右就可以看见少量细胞沿组织块周围爬出，这时候可去除组织块，全量更换新鲜完全培养液，再放置3天左右，首次传代即可。

18943340581

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+ X0 b8 u. |: p1 O8 I, Z8 _: J
* b/ m6 g1 u% [4 }1 {) H1. 得到华通氏胶后，如果没有残留的血液就不需要另外冲洗了，但是如果有血液一定要将血液清洗干净，不然血细胞会影响间充质干细胞的生长。% M) U+ q% H4 u( Z- O* Y, V9 O
2. 我们实验室目前是 铺完组织块24h后 补4ml/皿，我们用的是100mm的皿。之后每隔3天半量换液一次，一般7天就能见细胞，16天左右就可以收集细胞了。

willow0711

回复 zhangshich 的帖子
: ?1 B( C6 E! ^
7 h* a: _+ d% s哦，谢谢7 u# [% u* x% x4 t0 G
那您做是大概多久可以爬出来?多久去组织块？大概多少天可以传代

willow0711

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- }" x( l# [& T) Y$ z5 Q- K- Z7 s; s9 P5 M7 d- p
哦，谢谢

frankhu

把华通胶剪成一平方厘米大小，均匀排列到培养载体底部，用少量的完全培养基浸润，避免组织块漂浮。放培养箱培养3个小时后，再补加培养基至刚好浸没组织块，放到培养箱中继续培养三天后全量换液（不要用平衡盐溶液清洗），首次换液要避免组织块被吹起来。一般一星期左右能看到组织块周围能看到间充质细胞爬出来。待细胞长成比较明显的区域性生长后，可以把组织块洗掉。待细胞长到80%融合后，消化传代。2 a+ O( F% w/ R8 T  h$ b0 F
以上是本实验室使用的脐带间充质细胞的分离方法，仅供参考。

deshenglll

回复 willow0711 的帖子" I: L/ V9 Q% x, M- G; ^0 ~
2 O% [0 |3 l" b
洗个一两次就行了。换液最好全量换液。

mtdj1314

回复 willow0711 的帖子5 T* k# F; U" ^0 o0 D8 ^- _3 B$ P. {  s

9 `( w/ G1 z" u: g% _一般7天可见细胞

luyue6453

回复 单个核细胞 的帖子" V5 L) h4 g3 G

8 _& ?. f7 Y# N  t# h, o5 M% V# e你这细胞形态真好，不知道你需要多久能长到第三个图片那么多细胞，第四个是传代了吧！可以推荐一下培养液吗？

luyue6453

回复 18943340581 的帖子3 w" C7 l6 v9 J' b$ K! e. M  m

9 e  f7 M1 _" z) W6 E  H7 z8 ~你们是拨完先把组织块种到皿了？那么一条脐带种几个皿啊？等24h后再加培养液4ml的意思吗，还是种的时候就加了一些培养液？

单个核细胞

回复 luyue6453 的帖子$ u3 F* X: }1 I: C! h$ c  \

, \5 o* J' v" Q3 ~1 X从统计来看，没有添加任何细胞因子的状态下，15天左右可以长到如第3个图片（即大部分贴贴组织块周围局部细胞成致密状，第3个图片中的组织快已经脱落），可以进行传代培养。若是添加相关细胞因子，应该可以更快吧！
0 L' s/ _$ f5 s9 b, L) `& Y- m# ?  d* i6 f1 _
完全培养液为90% DMEM/F12（1:1）+10% FBS，均为市售商品化培养基，可以参考Gibco或者Hyclone的官网。