CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。% B, }. F5 h) }$ y
第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？
! g  D+ c& }* k1 q6 p第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。* }# l7 x( U9 E# @! t+ V8 d
多谢拉！
! C0 r2 Z& t7 k4 E9 W9 _) K

各输己键

CD3CD56双阳性细胞是什么细胞呢？你没有贴出那张1%的图来。; k( b& j4 q2 ]9 U7 t( w. e8 W
$ S9 ?" T/ b$ U, @/ V
CD3CD56双阳性细胞，应该算是NKT细胞，不是NK也不是T细胞。

rocfield

回复 lyj-0017 的帖子$ a$ K. X3 M, @3 M

# O- G( i- O$ R# f$ P5 h* H* Q感觉下图设门不太好，圈上了部分细胞碎片，门再向右一点，可能会好一些，但是如果这样设门检测的双阳细胞不到1%的话，重新设门阳性率也好不到哪儿去。从这个图中看不出CD56抗体有没有问题。

shizaihappy

CIK测CD3CD56双阳率时圈的细胞应该是淋巴细胞，可以加个CD45，要是没有CD3，CD56也够用了

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子
* D' E: r7 b8 A9 R* R; n
- @, u$ V" q) _5 A" P7 x, }+ \: V4 m现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子+ p& U4 M3 w) k# [

- U/ a$ S1 o1 C+ a  f再请看下面贴上来的双阳比例图。能否发一下你们做出来的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 shizaihappy 的帖子( m4 j0 R8 h* g5 L* y7 n

  k/ B) ~  J$ E  w5 o0 N# j是啊，应该是圈淋巴细胞门。能否把你们做的流式图贴上来学习一下呢？

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-2 20:03 8 V# d- l+ ^( v7 y; r3 h/ S' M: s
回复 各输己键 的帖子2 F% I5 x' V1 k8 ]( J
' `" {* b  t$ w4 \
现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

( E6 F' d5 L) K" Q- x+ `: L哈哈，我不做这个的。只是碰巧路过。
$ J# O' X( S7 J* H' U/ {, O/ k% e# i6 T
你这个应该说圈门，分析还是做的挺好的，细胞培养前后，FSC和SSC是有变化的，因此出现这样的图也是可以理解的，如果担心可以加上活细胞染料；另外，你PE的电压是给低了些吗还是抗体加少了，怎么需要用到Biexponential方式呢？机器是Cantor？
& `4 v" y% R7 L2 S5 o: s$ ]. ?- _* M- W

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子
7 `. i, \7 @- B! J% r6 `* {' Y  U1 i
1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。
3 }0 K5 w) i& q: T5 k4 x( B) q' R2、荧光抗体是买的BD的，说明书是按每1X10^6个细胞加入20ul荧光抗体。如果我是5X10^6个细胞也是加20ul抗体，对细胞染色有影响吗？; ^* U: P+ G) O9 e$ c  R0 a
3、Biexponential是什么意思呢？这个也不懂% P! d; J2 H6 ?5 v9 Q
4、流式细胞仪用的是BD FACSVerse TM

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-4 10:47
3 x3 Y( ~& d4 g9 F% G回复 各输己键 的帖子
# N- P+ J9 S' v1 A
) U: f$ K# ]  \1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。

5 r% C. e1 e/ c9 O* {  G对染色的影响不是太大，不过我们一般都会减半使用的，有的可能还要减得更多；Biexponential可以有助于显示细胞群的全貌。你这个图还是挺好的。