不同大肠杆菌感受态的区别

zm19900508

回复 weiyepan 的帖子6 B5 a* n1 o5 D( N  `% c/ `

8 K: O* l* ~5 Y* |: E( L' z嗯，用的慢病毒载体--PLKO，用StbI3转化时不长，用TOP10长了好多，但没有阳性。

zm19900508

回复 wf78365421 的帖子
. t1 \# }* u9 V! j) e7 {0 g# V5 |+ y
师兄说慢病毒载体最好不要用DH5a,很容易发生重组

老十

回复 石山巨石 的帖子* k- T( e; V0 ]+ ~; w/ X, h

& m: h0 N$ t# ]9 I只要lacZ没被破坏就行。一定要看plasmid 的图谱，puc plasmid 是被改造的很多，是否会留lacZ 不一定。

老十

回复 石山巨石 的帖子; U6 N# @. b' S' s4 ?' ~! u
6 e* i/ J5 B' R1 D' z
只要lacZ没被破坏就行。一定要看plasmid 的图谱，puc plasmid 是被改造的很多，是否会留lacZ 不一定。

老十

回复 石山巨石 的帖子
+ z6 c% O3 j+ H5 j% i2 C
2 k2 v3 C5 G2 n只要lacZ没被破坏就行。一定要看plasmid 的图谱，puc plasmid 是被改造的很多，是否会留lacZ 不一定。

老十

晕，点了三下就回了三次，谁能帮忙删了多余的吧。

weiyepan

回复 zm19900508 的帖子+ Y1 {* P, Y4 m  _  w

. Z. _% Q( a! T. c/ |7 K8 zStbl3的效率大概是DH5a的1/10，做得好的话。换一批Stbl3吧，得有10^8cfu/ug以上才好做。
! A7 F3 \. A+ G! r5 F要不然就是你引物没处理好，最好做个PNK再连接。

zm19900508

回复 老十 的帖子: g( i/ m) W% |6 K
+ O- h- p0 o- a
哈哈，找细胞海洋？

zm19900508

回复 weiyepan 的帖子  ^: O* D" c0 a& E3 V

; m0 f6 b" d7 V9 N$ }什么是PNK再连接，为什么要做PNK再连接？呵呵，麻烦啦

weiyepan

PNK 就是 Polynucleotide Kinase，让你先加磷酸基到引物5'端再做连接的意思。我们的确有试过做shRNA连接不做PNK转化不长的现象，尤其是引物质量不好的时候。