人羊膜上皮细胞的分离、原代及传代培养

单个核细胞

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谢谢，羊膜和绒毛膜已经分开了，应该是来源于羊膜的间充质样细胞，后面我会接着改进试验方法看看效果怎样。

piano尤尤

我以前做的是这样的
2 L' d' k$ V! ~1 y1 u商品化0.25%的胰酶消化15min左右(具体还要视样本多少)终止消化后; `  p2 e3 v* d4 Y5 k7 ]- G3 Q  S% d
再0.1%IV胶原酶消化再进行消化
5 A/ X+ j8 g8 ?0 w! X0 z0 A然后培养基中添加10ng、ml的EGF
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间充质的话是肯定会有掺杂一些的 但是如果你要稍微分开做的话 可以通过贴壁后消化时间前后来控制 一般间充质消化1min就下来 但是上皮细胞不会这么快消化 这样就可以分离纯化一点* I  R6 x: l- `" ?1 J: }
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如果没有掺杂间充质的话 其实羊膜上皮细胞状态也不会很好 传3~4代就
- g. C9 X$ F4 m1 F* L可以用间充质做滋养层 而来养上皮 状态会比较好

单个核细胞

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/ C- E+ N0 W8 ]% Q$ h8 S+ _6 ~谢谢，我在考虑有没有能将羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞分开的方法，例如一种选择性培养基或者添加物。从做的实验来看，间充质样细胞长的比上皮样细胞快很多，单采用胰酶消化羊膜组织所得原代贴壁细胞里间充质样细胞明显较少，若是用Ⅱ型或Ⅳ型胶原酶继续消化，再合并消化液，会引入较多的间充质样细胞。

siyubai1008

你用胰酶消化的浓度和时间大概怎样？获得的上皮细胞量大吗？ 我用两种酶混合消化得到的量比胰酶的要大  并且现在镜下形态观察大多为 上皮样细胞

jojo1988509

想请问楼上的大神们，两种酶混合消化的浓度和比例？