消化小鼠iPS克隆胰酶的区别的疑问

syacr

19号在论坛上发帖求助，好多热心的朋友帮忙，首先在这个感谢下大家，谢谢。
0 Q9 E6 b4 i9 G% y& ?3 E7 N接着，说下实验。我也采纳了几位的意见，做了平行实验，具体是这样的。由于之前的一批克隆没有消化开，但是终止消化了，就只能给铺到饲养层上面。但是，我的强迫症就来了。觉得这样一点用没有，开始新的一批还会是一样的结果，根本不解决问题。- g4 P7 f3 u4 I0 M7 P
于是我想将已经贴在饲养层上面的没有消化开的克隆重新挑取消化：" k9 |6 ~/ F) k3 C! ?
1）A，0.25% tryspin/1mM EDTA消化10min；（之前使用的胰酶，购买液体直接分装）
- o' p& J( V" j" M% ~  b2）B，0.25% tryspin/1mM EDTA消化5min；（同上）
4 {, o- }! u* l( b6 {3 k4 |3）C，0.25% tryspin/1mM EDTA消化15min；（粉末，配配好过滤分装）
4 r/ r6 Y. m" S. d# O  s& A" `4）E，胶原酶IV消化20min, p# E' v: p5 @% T* l: t; L
结果发现，A、B和E没消化开，C也没有消化完全，但是感觉比其他3组要松散，故又消化了5min，结果终止后，只有C组全散开了，已经重新铺到饲养层上。
* s& D. `: h" M! l, j# z0 \$ h对于克隆需求的胰酶，我真是完全晕了。之前我们实验室一直都在使用粉末的胰酶，但是发现消化效果非常不好，消化一般细胞都很困难，于是购买了新的液体的胰酶。结果现在只有它对克隆有效？？

markllq

胶原酶IV(浓度0.5%)消化20-30min，然后直接吸掉胶原酶（无需终止），再加0.15%胰酶3-5min，拍拍即散，培养基终止。

syacr

回复 markllq 的帖子' v7 s, d* k  V1 S7 t1 i1 F
$ Y4 c2 t0 C7 P. k
问一下问什么同时用2种酶消化，这样对细胞是不是会有些损伤。

markllq

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( D6 U+ b5 [, g; ~
8 z8 v& D4 I$ ]0 K5 @: m( [不会，两种酶的作用是不同的，消化诱导后期的iPS细胞这是我觉得唯一有效的办法了。

luyue6453

回复 markllq 的帖子- @9 u4 P9 V1 C/ g- Q
/ r) }# m3 b' I# J0 j7 n
还是第一次听到这样的办法，记下了，有机会试试，谢谢分享