精原干细胞建系后marker验证

20111109

8 l  U/ n; t& o) x: a* u# @6 L) |- v7 `
4 K" \  o; p; y; h

9 I1 G: h. K0 U+ O+ o! Z+ b0 m* f& F如上图显示的，我验证了PLAF  OCT4 stra8 C-kit SSEA1等3 g" F, m- v" S. ^6 r0 c1 X
我想问的是! P+ ?0 E3 ~  I
1、理论上，这些marker分别应该定位在哪里（核或质）
7 t! c% g5 v1 t4 z2、这些marker分别在什么情况下表达（即哪些是未分化SSC表达的，哪些是分化SSC表达的）* c& V# F" V8 r
3、有没有关于SSEA1的文献，比较新的，我对SSEA1了解很少。& X1 Q+ a" E% e
4、C-kit 的抗体哪个公司的比较好？有没有人做过的。
/ Y8 T1 O; p+ V( A; S刚接的课题，刚建的细胞系，各种懵懂，先谢过各位了~~
& b2 H9 A! U9 u8 {
9 |4 |" x8 P; k" D* W
" \; s) Z' U5 D# [" E8 j) z# `: D

jialiyang

回复 20111109 的帖子8 r# K: d+ w0 h3 O/ o

  W1 ~% a" n8 M! y  B4 W5 U1、对于你所选用的marker所在的部位你可以把你选用marker的说明说下载下来，里面会说明是膜蛋白还是核蛋白
$ q1 s4 k, A3 o/ L0 `4 j4、C-kit 也称CD117，我们实验室用的是Dako ,CODE A4502

bj123

回复 20111109 的帖子
# y3 o9 N  C% O, h/ C: X, n
8 b$ @9 \, I( u8 P& c& I你染得ssea-1好奇怪啊。应该是一个膜表达的marker。

20111109

回复 jialiyang 的帖子
8 K3 _' ]8 u! d, P8 c3 e* g; g' _
抗体说明书里面做的荧光许多都是在非干细胞里面做的，不知道有没有参考价值。。。

20111109

回复 bj123 的帖子7 e5 q5 h# `4 o( u( a

% k/ R( ^) D, H# q5 q, X嗯 C-KIT也是一个膜表达的蛋白，我做的这个结果是在核的。所以我觉得也许是因为C-kit 和SSEA1的抗体不行，而且本来我做的这个验证预期结果也是C-kit和SSEA1不表达的

moluxingke

照片不能再照的大一点了吗？那样是核定位还是胞质或是膜定位也好看一些呀。

20111109

2 @) u; t  [; T* P3 g) o

20111109

回复 moluxingke 的帖子
$ L4 K& z$ d5 @; _4 f- C. a
+ ]# {3 t7 x$ j9 H抱歉 我把40X的图原图放上了~~

zhangyan813

首先我想问一下，你做的是什么物种的SSCs，大鼠、小鼠还是大动物？不同的物种现在已经有研究的很清楚的特异标记基因，建议用特异的基因做鉴定。" T, T4 ]& V1 D* ]- u, R2 L
其次，你的SSCs，通过形成clony的样子感觉还是蛮好的，长得很好。但是我建议你做染色的时候，不要做这么大细胞浓度的，这样的话，一大团是看不清楚，到底是在膜上还是在细胞核里。打算做染色的wells，最好是接种的时候少一些细胞进去，或者是生长了两三天的时候就固定来做，细胞浓度低一些，会好很多。$ W( J& K$ E1 K( o
再次，PLZF, OCT4都是核定为的，这些都是要做通透才能够得到很好地结果的，你不知道在哪里定位，不知道染色是怎么做的，没有通透得到的结构是否可信？另外，c-kit建议你最好不要用来做鉴定，这个基因被认为是分化的标志，但是在SSC里也还是有表达的。

20111109

回复 zhangyan813 的帖子/ }" |6 Q/ r0 S

- p, o0 B+ q- ^% Q) o; v0 ^感谢您的答复~~5 j7 O) z& |; A. K. G
我做的是小鼠的SSCs，因为我是第一次建系，第一次做milicell，所以什么都不知道的情况下就做了，(⊙o⊙)…实验还是应该了解全面再做的。- u+ w: _( `) V3 A# m
您的建议很对，核定位要做个triton打孔。0 o/ K5 n9 @. M$ C/ D: T8 e
但是，之所以染C-kit就是想判断培养的SSCs是否发生了分化。。。文献里说未分化的SSCs是不表达C-kit的，因此做了。