质粒提取不纯

like_gj

最近做克隆，提取的质粒测序是正确的，反馈信息说信号不好
8 q& `/ _7 ~& j5 X" q# q; i3 ?7 Q0 w我自己跑电泳时发现总是有两个质粒条带（开环，共价闭合，线型算一个质粒）我需要的是8K4 ]; f" G7 Z' Y. ^: R
大约在4K左右还有一条9 [2 ~8 J  c) F5 I7 Z
然后我用这些质粒重新做转化，挑单克隆，提质粒后发现还是有杂带
0 j7 V; C5 N$ g; P  ^4 B9 p请问如何清除这些砸质粒？+ o, s; {' Q$ D9 b

like_gj

另外，我用感受态直接摇菌培养
9 c* H+ s. k9 |提取的质粒大约40ng/ul (共70ul)，请问这个感受态是不是有问题？

mckf111

like_gj 发表于 2013-7-15 15:26
# J0 U  J& u. C. b. h另外，我用感受态直接摇菌培养. D2 H. `: X+ b0 _# D& u; q7 i
提取的质粒大约40ng/ul (共70ul)，请问这个感受态是不是有问题？

, \+ [3 W! b: t- o9 t4 x
感受态应该是空菌 不含质粒 应该考虑重新购买了

Dancmacabre

40ng/ul，这个质粒的OD值很低。建议你直接菌种划线，最好挑几个单克隆做下PCR检测，接阳性单克隆于试管在摇床培养。最好分析一下该质粒的基因序列，如果是你自己构建的克隆，你要弄明白它的功能区里面是否插入致死因子编码区，或者有其他增强型的表达蛋白，有可能会决定你的质粒拷贝数很低。至于有一个4K条带，那可能是断裂的DNA片段，你可以做一下PEG纯化，若效果不明显，只能做胶回收。

chenhuachen

小弟现在做p53对转化细胞代谢的影响，急求TET四环素诱导的wt-p53质粒，对接下来的实验非常重要，跪求论坛里的园友谁有这个质粒，可否赠小弟一点，不胜感激！& m% m' B* W8 \, W
人的或者大鼠的野生型p53都可以。