CIK培养中的细胞因子添加顺序问题！！！

lyj-0017

      传统培养方法都是D0添加IFN-r，D1添加IL-2和anti-CD3 mAb，这个工艺大家一般都是首先在培养瓶中培养，几天后转培养袋或继续使用培养瓶培养。4 B& T3 L2 @0 G7 Z7 i; X$ j
    问题1：传统工艺为何必须要首先添加IFN-r，24小时之后添加后两种细胞因子？可不可以在D0天同时添加IFN-r、IL-2和anti-CD3 mAb呢？5 S* D. e6 P# m  ?3 m- `5 W2 I
    问题2：是否可以分离出MNC后直接转入培养袋添加细胞因子进行培养呢？
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    期待高手不吝赐教啊~7 b0 _2 U9 X  d) t& N

jxydiandian

之前看过一篇文献，说第一天加IFN-r是为了增加细胞表面的受体对IL-2的结合率，并且增加细胞的细胞毒性，大概是这样，因为是好久好久之前看的文献了，不太记得了，回答有失严谨，请见谅。

jxydiandian

对于第2个问题，是否在培养袋直接培养要看细胞数量的，如果细胞数量太少，在培养袋培养，细胞密度太低，不易于增殖

jxydiandian

补充：在诱导CIK细胞形成过程中加入IFN-γ可降低IL-2 用量,同时IFN-γ加入的顺序与细胞毒活性密切相关, 先加入IFN-γ后加入IL-2 可提高细胞毒活性, 这是因为先加入IFN-γ, 可促使PBMC上IL-2 受体数量增加,从而有效地激活效应细胞

lyj-0017

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$ E9 j. T7 I& W# [9 u: d" v1 R& S$ _4 e& O: @" P, A1 U# v# O8 `7 }9 ~$ }
如果细胞数量够多呢？比如使用血液分离机分离单个核细胞，这样分离得到的单个核细胞相对较多，这种情况下是否可以三种因子一开始时就同时添加呢？

jxydiandian

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( k. W0 u; F3 h4 C: Z
. [0 Y5 F* S" ^) ^我觉得你应该把我的回答在看一遍

chslyx

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0 U8 [, N9 N$ `! {3 Y: Q- ~
- t% P- l) j$ l第零天加IFN-R是为了增加细胞毒性，前二十四小时主要是诱导细胞的毒性，加了IL-2的话会影响诱导的效果，，而问题二主要是因为细胞密度问题，因为刚分离出来的MNC会比较少，用培养瓶会增值比较快，因为细胞聚集的话更容易增殖

lyj-0017

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+ ?5 q( C- d# @8 t0 X; D% _
2 C/ l5 `- b9 C不好意思哈，一开始没有深刻领悟你的话，现在明白了。那你认为转袋的细胞密度应为多少比较合适呢？

jxydiandian

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3 N8 Y1 ]% B' J2 `2 E$ Y- B5 ~/ f- t
6 h- ]# ^5 _1 a' P$ R转袋的密度跟瓶扩的密度是一样的，差不多还是按0.5-1*106/ml密度吧

lyj-0017

回复 jxydiandian 的帖子2 Q" G$ X% N; E( r  R9 k$ E
" ?4 N4 N% }+ K' M5 V! V
嗯，最近就按照这个密度试试，非常感谢啦~