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干细胞不白提问:关于间充质干细胞接种密度 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2013-6-9 15:05 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
一个还在干细胞科研大门外的科研小白求助,间充质干细胞传代培养时,接种密度是怎么确定的?普通情况下是多少呢?
* A1 E; i' F( {5 T1 K5 u* l, A; BPS:由于是个门外汉,可能提的问题会比较幼稚,但希望各位大侠能够解答一二。
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沙发
发表于 2013-6-9 15:54 |只看该作者
关于接种密度,要看细胞生长的速度。我现在做的一般是这样,5000个/cm2.长的快的就传稀疏点,长的慢的就传密集点。原代一般1传2;后面的一般1传3,或者1传4那样子。
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藤椅
发表于 2013-6-10 10:37 |只看该作者
3000/cm2至10000/cm2都有,还要看是哪种来源的间充质,培养条件也有很大的影响
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板凳
发表于 2013-6-10 12:17 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
我们都是根据生长曲线决定,如果倍增时间长就稍种密点,反之亦然,假设你的细胞对数生长期为3天,那就根据对数生长期开始相对应的浓度接种,这样收获的细胞会比较多!
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金话筒 优秀会员

报纸
发表于 2013-6-10 15:15 |只看该作者
各位测量过间充质干细胞的大小吗?长度、宽度大体能在什么范围?MSCs的倍增时间是多少?
' y3 z2 ^4 H9 E; c& w小鼠的间充质干细胞和人的间充质干细胞还是多少有点差别的吧!
& D+ C. C* V7 O% b9 e! g间充质干细胞的专著中提到人的MSCs融合度达到50%就可以传代了,而相比较小鼠的80%传代要好一些!
' C8 i' i# L( N% q4 k& A% R我们通过计算可以得出5万/cm2的MSCs(估算100%融合度),但是实际情况可能1万/cm2的密度都何难达到的。
. o$ E2 Z% Q  C: m" B4 H$ E0 E    个体差异难免。基本的数据搞不清楚,就总是在估摸着做实验,这样是有些不准确的。我有一次在六孔板中培养的MSCs100%融合,细胞量10万左右。
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地板
发表于 2013-6-12 11:21 |只看该作者
回复 cageling267 的帖子
- X, S' N. M# }9 Z: O* o1 i
2 |: A7 ~3 b$ `* I" x4 D* b对细胞要求不是很严格的话,接种密度接多少的都有,依情况而定,一般原代1:2来接种,传代培养1:3,1:4,1:5。这跟个人操作的手法和物种都有关系,所以具体接种密度个人实际摸索中总结。
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金话筒 优秀会员 帅哥研究员

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发表于 2013-6-14 09:01 |只看该作者
回复 cageling267 的帖子
7 o$ N7 [  I, c6 X, @- U& [$ ~7 C3 {" e
建议接种密度为2.0×10^4 cells/cm^2。
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发表于 2013-7-12 01:19 |只看该作者
人的MSC比鼠的好养,这很正常。一般来说10%血清培养基的接种密度在3000/CM2 比较合适,无血清的接种密度在5000/CM2左右。建议传代:人MSC 70%+ 鼠80-85%+
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