所有的神经干细胞都表达nestin吗？

lansedecao

我取孕13.5天的胎鼠做海马神经干细胞（不是很精确）原代培养，得到的neural-sphere，提RNA,反转得到CDNA，用nestin primer去扩增得不到产物，现在不清楚得到的sphere是不是neural-sphere，请问师兄师姐是怎么得到神经干细胞，怎么鉴定，如果用胎鼠大脑做原代得到细胞球除了neural-sphere，还可能是什么细胞？

zb_ming

巢蛋白（nestin）是神经干细胞的特异性标志物。但你用来做DNA扩增扩不出来，首先要排除引物原因：是否特异，二聚体等等。还有实验过程不出问题。再去找细胞方面的原因。你说用的原代，但是原代杂细胞和细胞碎片比较多，对提取rna纯度有影响，你不妨传个两三代再提试试。

lansedecao

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8 t; g* G& I6 K( Z$ S# T( G
( N# L' x* J; W0 e6 b9 W: a& C, J引物应该没问题，是从一篇不错的文献中看到的，用阳性对照（大脑组织提的rna反转的CDNA），没有杂带，二聚体也不明显，用传过好几代的细胞也扩增不出。

death0270

要不你先用免疫荧光染个色看看你的神经球是不是表达nestin，按照我的经验，一般原代到P3的细胞nestin表达都不会太高，我们P6代的细胞nestin表达才会介于40%-80%之间。

lansedecao

回复 death0270 的帖子* o/ i: M( S  m' p! b2 \( A
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我也做过免疫荧光，和western-blot，都没看到有表达，如果传代的次数很多，是不是nestin的表达越来越少

lansedecao

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' a$ Z3 o3 g" l. ]请问你做免疫荧光用Triton X－100通透吗

death0270

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; A( j/ W* {7 d6 C8 q, k& b8 r* _! \- X8 P, \! \7 H
我们实验室养的神经干正常在P7之前nestin都是越来越多，到了P7往后才有减少的趋势，不过这和细胞培养的状态有关，有些细胞由于种种原因导致状态欠佳的，会在早期就出现nestin减少。测nestin打孔是肯定要的，不过我们由于也做流式，所以用的是BD公司的一款成品。具体成分我还要找找，但是用Triton X－100应该是没问题的，有其他实验室也用过。

lansedecao

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; }9 ^' K' Y+ v" o6 S5 B那你们有没有去诱导神经干细胞，让其分化，我加血清和RA，没有分化出neuron和胶质细胞，不知道是诱导方法不对还是培养的细胞不是神经干细胞

death0270

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, c( f. g" y$ R+ f# f  e诱导过，都没问题。诱导分化的条件其实也是需要去摸的，文献上的不一定好用，所以不好说是你诱导的条件不对还是什么。但是如果你们神经球都测不出nestin，那么很可能你们养出来的不是神经干细胞。

lansedecao

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+ z, J6 H3 I, q4 y' o0 Y嘿嘿，再请教一下，你们应该也是由原代获得的神经干细胞，那你们取孕几天的胎鼠，用什么培养基，在常氧下培养还是低氧啊