脐带血间充质干细胞提取

小公

昨天用淋巴细胞分离液法分离脐带血，分离液是GE FICOLL，密度1.077，   1   首先脐带血与PBS 1比1 混合均匀， 2,  缓慢叠加与分离液面上，比例1:1,   3 ,  2000r/min，离心30min ，始终未发现白膜层，不知哪里出问题？ 看上去只有2层，上面是黄色血清，下面是红细胞。  

bsx1111

离心时应该快升慢降速，降速太快层容易分散，再有你的脐血中细胞是不是少啊，不用PBS稀释，直接加与分离液面上，比例1:1试一试

小公

回复 bsx1111 的帖子3 B8 |3 E2 G! p! d; @% c* M: W0 G, T
) M! ^4 ~( C% _- |. u- Y
离心机的设置确实是个问题，脐血量不少，大约80ml，不和pbs混合的话，是不是太弄了，不容易分层啊？谢谢

壹DD

1.采集的血量足够？血用盐水稀释？4 k6 A5 f, a* S! M* U# O" g
2.稀释后的与分离液的比例为2：1
% N, h  n6 g" e) p  }' Y3.用50ml的锥底离心管
7 O, \7 \6 G5 r8 h" B4.离心机是否达到要求？品牌，thermo,设置参数：升降速、离心力、时间？

HHvivian

脐血 一拿到应该尽快处理，不知道你的保存时间是多少？时间越久，分离效果越差，甚至分不出白膜层。

HHvivian

应该有四层的，从上往下，黄色血浆层，白色白膜层，透明的分离液，红色红细胞层。

pailishi

离心加减速度调为0，也就是带刹车即可，3ml脐血也可以分出白膜层

小公

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9 r' x1 Z! a2 `: {: U3 r5 R. `3 F( w
你好，血量是足够的，80ml，用PBS稀释的，离心机是水平转子的，2000转，30min，估计是升降速度的问题

小公

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+ i3 X0 T' |! G* x; c8 I
你好，脐血收集后4小时分离的，下次早点提取，另外，血量80ml，需要用淋巴细胞分离液很多，可以先进行脐血离心去除血浆或者进行羟乙基淀粉沉淀吗。谢谢，另外，分离液你用的是哪一种？

呼吸

1、脐带血不要保存时间太长6 e( d7 b! m( D/ Z4 N
2、用分离液时，最好使其在常温4 @5 W1 q% \5 s3 u8 C$ [
3、稀释后的与分离液的比例为2：1* m" h5 Z9 A! @' p5 W; R
4、可以尝试一下1310g、20min
+ \9 L7 y8 ^1 f0 m8 T5、降速一定要慢
  W7 x4 M. o6 M' H$ P. Y2 H6、脐带血培养间充质细胞，是有一定几率的    @& S/ @: E; R+ s. w! ]$ W
7、祝你好运，下次一定成功。# S. N1 g$ N& _9 Z* _