SDS-PAGE蛋白Marker总是歪掉，有图为证，请高手指教

jiangyinshen

求助各位高手，SDS-PAGE电泳结果总是这种样子，已经连续五次这样了，去离子水新制备的，pH8.8和pH6.8的Tris-HCl都是春节后订的，SDS和APS也是现配的，TEMED新订的，只有30%Arc-Bis是去年的，这些试剂中该放4度的都一直放在4度，我想不通到底是哪里出了问题，会不会是30%Arc-Bis过期了，请各位高手不吝指教，谢谢！

eley

你跑的电压时多少？？
8 \4 n  Y" z7 N$ ^0 r还有就是用多大浓度的胶？

袁小懒

加大胶浓度，制胶时注意浓度混匀不要起泡应该会好些

加贝

maker 歪是不是，有的孔空着没补loading buffer ,去年的ARC-BIL是不会有问题的，我用的也是去年10月配的，是不是配胶时没混匀啊！

wbs1986

marker两边的孔没加样本空着的话，marker可能会向两侧扩散，建议将空的孔补上loading buffer。另外marker两边的孔如果样本上样量较多，也会把marker挤的很窄，此时建议marker那孔也加相应量的loading buffer。

aulenuyah

建议试试：将marker的点样量提高到与样品相同；或者在marker两边再点一些样品，也许能把marker“挤”回来

daviddow

是不是配胶后放的时间长了？

zsg

胶不匀，还有就是边上的孔容易这样。

hbs08230

不同的样品的浓度会不同，所需的上样量体积会不同，将所有的样品用lysis buffer补齐到相同体积，然后加loading buffer。load gel 时mark先混匀等同样品的loading buffer，所有空孔加等同样品的loading buffer。上层胶进胶时恒压80V，等进入分离胶后升高电压到恒压100V（8%SDS-PAGE) 120V(10%SDS-PAGE)。 4 O  T) R8 Z9 l8 n7 d  Q5 T* n9 R
配上层胶前先用双蒸水洗去isopropanol再倒入上层胶。上样品前先空胶在running buffer里恒压80V跑几分钟，再关电源开始上样。

寒山拾得

1. 每个孔都要上等体积的样品，没有样品的空上loading，marker也要用loading稀释到相同体积。
4 g/ }: O0 ]0 V5 |+ N2. 加入aps和temed后立即混匀，防止局部凝集，胶不均匀。
, a3 h" {  G/ c  }$ `3. 注意海绵和滤纸上不要有疙瘩，容易把胶压瘪，使条带变长。