mSSC体外培养求助

w343989328

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. b0 d9 Q8 @3 b; I! F, k5 w2 C& {养了半年mSSC，由于实验室刚建立这个平台，没有太多经验，而且曲细精管移植还没有做过。这半年来体系不稳定，养SSC出现过各种形态，发些照片求有经验的前辈们鉴定一下。  @6 _, W) p' B3 F0 s+ i. ?4 D
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jhu132llh

第3排、第4排和第6排的mSSCs形态不错；4 m3 H$ ]! Y; l$ d+ [- N9 Z7 W
第一排的细胞状态已经不好了，估计是差不多了；0 w4 u& _+ W) L
第二排的细胞中杂质太多，影响纯度，估计还有一部分死细胞和分化的细胞；5 V' n$ c$ c" \) P+ Y. f
第三排的细胞最好，细胞圆润，核质比大，细胞簇形态与SSCs细胞簇形态特异性高；. I, |; p9 G2 U% V6 Q" T
第四排的细胞还行；
5 m- h: a$ Y9 @. V, K0 [第五排的细胞还凑合，就是ES-like的克隆有点散，貌似分化；) [  J( b& T. c6 B% A
第六排的细胞ES-like的克隆比较好，估计有可能是mSSCs向ES-like转化了，可以检测一下，这个是有文献报道可行的；# {! C4 k8 t$ M, N$ U
第七排的细胞感觉基本上没几个活细胞，状态不太好；! ?% `  L  p) A( B
第八排的细胞密度太高，看不出来什么情况，不好评价；
9 C' v1 I7 }: j7 }- a6 J以上内容纯属个人意见，仅供参考6 {4 T6 k; T1 S$ Y: [: z+ L

我爱火热的冬天

你这个是不是使用差贴后养的？有没有在饲养层上养？贴几张在饲养层上养的照片看看

w343989328

回复 我爱火热的冬天 的帖子$ O* k1 P1 e. M- T) i
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用的磁珠。。你看看上面没滋养层么？

我爱火热的冬天

我以为差贴后直接培养的呢，你饲养层的密度是不是有些稀呢？对了，你有没有做流式检测，我也在做这方面的实验，想多交流下，多学习

我爱火热的冬天

我以为差贴后直接培养的呢，你饲养层的密度是不是有些稀呢？对了，你有没有做流式检测，我也在做这方面的实验，想多交流下，多学习

w343989328

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  t6 K/ {' x' H7 l" f
流式检测什么呢？我们现在鉴定的方法有RT-PCR WB IF，还有准备做曲细精管移植

我爱火热的冬天

流式检测你用磁珠分选的细胞的结合率，这个可以用美天旎的cd90-fitc，我不知道有没有必要用其他抗体进行检测，因为可以做免疫细胞化学进行检测，只是得不到比例，用流式可以得到比例，我做的思路和你的也差不多，只是不知道WB IF是如何检测的，之前看文章没有看到用这种方法，对了，你们的实验室在哪里，移植技术成熟吗？只是做小鼠的会不会太没意思，毕竟国外在小鼠上非常成熟了

hai344239012

我觉得你的SSC养得非常的不好, c0 x! I' N9 K' C+ T; Y. o
可能 feeder 做的不好 建议重新做做 做过支原体检测吗？

w343989328

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( A2 [! e/ j5 L% G/ [6 Z/ c' A  V* P7 V% w2 @1 x
嗯，谢谢你！我现在已经可以养出来了。上面那些都是失败的范例，确实是滋养层太差了