病毒感染细胞没有荧光，但检测有外源基因的表达

jiaocuihua123

我用pLM慢病毒载体，转染293ft细胞生产病毒，然后用其感染细胞，但是没有荧光，然后提取细胞RNA，反转录，经行PCR，发现有外源基因的表达，请问为什么会没有荧光呢，是载体出了问题吗，请大家指教。

misser217

同问……

sizhengliu

你的gfp序列是在目的基因序列后，还是前？

daviddow

我也遇到这种问题，既然有表达了就下续试验吧。可能和你载体有关，不是大公司的载体，可能就存在这种问题。

jiaocuihua123

回复 sizhengliu 的帖子9 i/ t9 p( e8 O+ v* W
7 N( z5 F6 f9 m0 U& ?% a
是在目的基因之后,用2A连在一起的,谢谢.

jiaocuihua123

回复 daviddow 的帖子
3 f1 j% ?- y2 U% [
- F% K3 K5 u% X4 I嗯,但是想用阳性的细胞做克隆,所以没有荧光的话没法保证阳性率,只能是盲做.所以很麻烦,是不是载体变异了呢?

jiaocuihua123

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2 L- R* y* p& w$ d& s" y) I) g  Z# W3 u9 S  N8 o# L
不好意思,我记错了,荧光序列是在目的系列之前,通过P2A相连.谢谢.

sizhengliu

回复 jiaocuihua123 的帖子" q# i8 u1 _- N' ]& B; C
% j7 H2 `* a" E% T0 j6 K; D
这就可以解释了，部分载体只表达了目地序列，到gfp序列时表达已经很弱，因此，你观察不到

neuralstem

用抗体染一下可能就看见GFP了
. {* n) N5 c/ [; p

prophe

! j# w3 Y' H0 Z) H
: Q9 \4 o. l7 z; `& R. H
也有可能目的基因在细胞有本底表达，建议做一个不感染的作对照。