大鼠精原干细胞培养，细胞死的很快

怡雯小叶叶

我在养大鼠的精原干细胞，我是把大鼠睾丸消化成单细胞了之后直接铺在孵过明胶的六孔板上，24h之后，把体细胞上附着的生殖细胞吹下来，铺在有MITC-STO作为feeder的12孔板上，但是体细胞长的太快，总是有很多死细胞，使得精原干细胞分化的很快，很难聚集，有没有什么办法

w343989328

试试延长第一次贴壁的时间，我没做过大鼠的，但是小鼠和猪的都做过，都要60h以上。
! q* o, r9 s" ?5 _+ q& j& J+ ]另外吹下来的SSC中肯定会有体细胞的，一开始要经常观察，把握好传代的时间

w343989328

试试延长第一次贴壁的时间，我没做过大鼠的，但是小鼠和猪的都做过，都要60h以上。
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怡雯小叶叶

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我最长试过24h的，然后吹下来的细胞悬液我又重新铺到gelatin孵育的六孔板上24h，感觉第二次贴壁的体细胞不多，我就只采用24h就把吹下来的细胞收了，我就感觉刚种到MITC-STO上的细胞还好的，但是慢慢的，体细胞就长的很快很多了。60h的话，会不会影响干细胞的状态啊？而且传代了之后，体细胞还是会跟着带到新的培养基里啊，你传代是把干细胞吹下来传代还是直接用trypsin-EDTA消化下来传代的呀？

w343989328

你重新铺到gelatin上，贴不了的体细胞还是贴不了啊。可以选择其他胞外基质处理皿底再进行一次差速贴壁。0 n' n! W+ |1 z; a$ P+ J
我们做的时候，SSC在有血清的培养基中超过70h没有问题。8 l: D; Q5 q2 |: _9 h! e
传代时一般是吹下来的，而且我记得文献上好像有建议大鼠SSC最好不要胰酶消化。

怡雯小叶叶

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不用胰酶用什么消化呢

w343989328

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不用消化的，反复吹打，SSC贴壁很不牢的，一吹就下来了