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楼主: wwy551
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[请教] 胶回收的问题(续) [复制链接]

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发表于 2013-11-11 20:32 |只看该作者

胶回收的问题(续)

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& a2 h- ^+ @8 Y/ S& t/ @" J, l3 r' O8 s0 ^  N+ b) W( J# Y( O
其实你这个回收产物直接做连接应该也没有问题,连接以后挑菌再做克隆检测应该也没问题
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发表于 2013-11-11 20:32 |只看该作者

胶回收的问题(续)

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$ x8 o3 G  C1 O' v. C- Y1 J# ], [- ~+ N# }$ H1 {& e" ~- ~
其实你这个回收产物直接做连接应该也没有问题,连接以后挑菌再做克隆检测应该也没问题

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发表于 2013-11-21 19:56 |只看该作者
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- t" g9 ^9 ]0 {) \" ~
6 O$ f+ i. H2 S8 h1 F& u. n不是两次洗脱,就是同一次洗脱下来的DNA跑两次胶,产生了两次不同的结果。我现在大概知道什么原因了,可能是在回收的过程中DNA变成单链了,导致疑似杂带出现,但是在保存的过程中单链会自然复性,所以又变回一条带。这种情况我们遇到好多次,但是继续下游实验都没有收到影响。
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发表于 2013-11-22 14:49 |只看该作者
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不是降解,降解没有这么单一的条带。建议重复一次,换新的电泳液,EB和buffer。不能解决可能要换PCR条件。
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发表于 2014-1-6 18:45 |只看该作者
回收的效率好低啊
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发表于 2014-2-19 21:42 |只看该作者
其实下面那条带是你回收DNA片段的单链,原因我就不解释了。你只需要注意2点,1是下面那条带的大小应该是上面条带分子量的一半。2是你把回收的DNA变性后缓慢复性后电泳就会发现只有一条带了。祝好运!
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