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请关于PC12细胞的一些问题 [复制链接]

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金话筒 优秀会员

楼主
发表于 2012-12-17 16:15 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
有人用PC12细胞做过实验吗?有些问题请教达人,2 ^$ c( J; K% O1 D
1、一般是用分化的还是未分化的细胞做实验呢?3 h/ U' d/ N, f1 n( |( A
2.是不是如果想研究神经元功能的话就要将之诱导为高分化型细胞。
/ x2 g5 s/ d1 j8 ]3.听说PC12传代次数多了也会分化,还会疯长,那这种分化和NGF诱导的分化结构功能有什么区别呢?9 P# I& J& [4 ~3 ]/ x/ g# @# B% T+ {
4.NGF诱导的高分化PC12增殖能力怎么样,可以进行RNA干扰等实验吗?# Q, j* N/ y& H$ }; h
' J2 V/ w1 \& S2 D  I0 U- h
谢谢啦 ^^
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沙发
发表于 2012-12-18 13:58 |只看该作者
看了一些讨论,有点明白了
4 S$ w9 H4 Z% l6 z0 n9 W1.用分化的还是未分化的细胞做实验要看实验要求,好像做药物筛选用未分化的,因为分化后的细胞对药物更敏感。/ }5 B1 N5 C+ A/ c+ L3 h6 H  v
2.但又有疑问了,如果我做神经元相关的实验是不是一定要做分化的呢,还是没有答案
/ b- t, k( c& O3.国内的PC12有未分化、低分化和高分化之分,但是ATCC貌似只有未分化细胞,国外文章中做PC12分化一般用NGF诱导,Greene LA , Tischler AS . Establishment of a noradrenergic clonal line of rat adrenal pheochromocytoma cells which respond to nerve growth factor. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 73: 2424-2428, 1976. PubMed: 1065897  文章里讲NGF诱导时的PC12没有增殖能力,但会一直分化,停止诱导后分化停止,增殖开始继续。这与国内的高分化PC12细胞株有增殖能力且不弱的说法不一致,而且国内高分化PC12的来源似乎有点不明确,细胞形态也与NGF诱导的细胞不一样。
4 _7 C, t: o8 \: k  [. W( i$ r
4 @. O9 W, G* E. K9 k' X所以又有了新的疑问5 J# k1 ]/ x& y5 R# B8 ?% r4 E
a 用国内的高分化PC12细胞株做实验能被杂志认可吗?+ I! i& g" S/ n/ t8 K) F4 i
b如果不用高分化细胞,因为要做转染,是否必需保证细胞增殖能力呢?如果一定要用有增殖能力且NGF诱导分化神经元的PC12细胞做的话,可以这样设计么:先加NGF诱导至突触形成,停止诱导,恢复增殖,再开始转染?
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藤椅
发表于 2012-12-20 12:44 |只看该作者
我以前一直做PC12,建议如下:
5 y' p! f1 V4 h3 t. o1 国家还是那个通用的只有未分化的PC12,加了NGF后增殖逐渐减弱,长出明显突起,最后几乎停止增殖。
0 E) E: I; [6 v& I* }9 X7 F2 国内的低分化和高分化PC12细胞是中科院细胞库的。事实上连他们自己都搞不清楚他们这两株细胞是怎么个情况。我以前还电话咨询过,他们就简单滴说:不知道. 令我非常气愤。1 C; o% t6 J6 s# u6 _
3 我以前也查过是否有用中科院的高分化细胞株发表的SCI文章,截止去年,就只有一篇,而且影响因子很低,可信度就打折扣了。% x7 l. k2 [; \
4 如果你要买PC12细胞株,建议你到武汉的CCTCC去买,他们的细胞株很不错,以前我一直用他们的。
6 b( ?7 M7 s, ?3 w6 s! Y+ @5 PC12做神经元实验可以用分化的和未分化的。特别是如果你要观察神经突起什么的,就要用分化的。
5 K# X( p) t. i! O* j6 有几个建议你可以参考:1 你为什么不先转染PC12,在做分化,或者筛选出稳转株后再做?2 如果你确实要做神经方面的实验,可以考虑用元代细胞或者神经干细胞。3 SHSY5Y和N2a都比PC12好养,而且也可以诱导分化(诱导因子都比NGF便宜),你可以使用这两株。
$ U, \# |, n9 Y" q6 _5 X9 r) Z
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板凳
发表于 2012-12-21 09:38 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
本帖最后由 86964109 于 2012-12-21 09:45 编辑 & ?, h; M4 w. Q/ U; e9 R# b
- K9 R$ s7 F$ g6 v' P3 |  O
回复 chentian820 的帖子/ @% V: F: }! W3 t( X

2 e& Y7 H+ V! p- |实在太感谢您的指点啦,是这样的,我想研究氧糖剥夺以及信号通路对于神经元细胞增殖和凋亡的影响,所以就想是不是要在诱导成熟的神经元细胞中进行实验,其实后续实验也没怎么想观察神经突触变化。另外考虑原代神经元细胞和神经干细胞不太好分离培养,就想找个成熟点的细胞系了,看过一篇文献是先慢病毒转染2d再NGF诱导3d的,做的挺漂亮的,不过我想做普通的瞬转,考虑到NGF诱导需要较长时间,担心瞬转会没有效果,又有点局限在一定要在得到神经元细胞基础上做实验,就这么设计了。。。
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报纸
发表于 2012-12-26 17:03 |只看该作者
回复 86964109 的帖子
. N6 E8 S& L6 m" c+ z. v6 Y5 P& \/ y7 C, G+ G3 |# Y% \
文章题目是什么,可以提供一下吗?

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地板
发表于 2012-12-28 10:30 |只看该作者
本帖最后由 86964109 于 2012-12-28 10:30 编辑
) X( y6 @: B$ ?
5 c$ t' y1 d6 A3 }; L! g回复 lhmxm 的帖子
. k( N4 b+ o, [5 U1 }
# ?8 ]+ Z) Y4 Q5 ~* ^- d4 K) A
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发表于 2013-1-2 22:07 |只看该作者
回复 chentian820 的帖子
/ z7 s" L1 p1 O% _$ S
; K% ~1 R' D6 H2 c5 E, vCT!!!!哈哈~

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发表于 2013-1-2 22:15 |只看该作者
前段时间用了一阵子PC12,糊里糊涂的用着,后来才知道PC12是可以分化的。后来比对了下,发现我们实验室的应该是分化后的,都是有突起的,细长型的。
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发表于 2013-1-3 10:56 |只看该作者
回复 碧落 的帖子4 U' h3 c- M' {9 w* x& k' o

* @: H. `! F$ w# |你的分化细胞是培养过程中自己慢慢分化的吗,还是加过NGF的,我看到直接培养的分化型PC12好像是菱形的,没有突起
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发表于 2013-1-3 17:09 |只看该作者
回复 86964109 的帖子
! U' ]/ B3 _, D5 [# m
2 }- h0 H9 U# r6 m$ @4 x- B额,其实我们的就是普通的培养基HG-DMEM+10%FBS。不用加NGF,可以传代,生长速度也可以的。形态嘛,说菱形也可以,就是有突起的,不是未分化的那种圆球形的。
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