同时提取DNA和RNA

bb6120

不知道有没有大侠同时从细胞中提取DNA和RNA不？小弟最近用TRIzol同时DNA，RNA。DNA的提取效果一直都不好，降解严重。恳请各位大侠支招！！！！或者还有什么其他方法可以同时提取DNA和RNA吗？4 _: F: z' G  X) J) @0 A0 Z  w% n* U
先谢过各位大侠！

86964109

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& F2 k# h; o+ J3 A( H9 q我们也是trizol法 参照http://refer.biovip.com/doc-view-9190.html做的，DNA部分基本只用醇沉就好了，收率还可以啊

452359357

你可以讲样品裂解后分成2分 一份提DNA 一份提RNA   也可在提RNA时 从第三步离心后的沉淀中提取DNA （这步含DNA较多）

bb6120

回复 86964109 的帖子, U5 f$ H) p! l/ y% v
0 Y) p! F+ X0 B+ u5 O
这个步骤我也有的，我也是参照这个步骤，但是提出来的DNA到最后都是有降解的。你们提的DNA没有降解吗？能给我说一下你们的一些细节吗？比如说，pH为8.5的0.1M柠檬酸钠（含10%乙醇），你们是怎么配的，怎么保存？先谢过！

bb6120

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关键不是样品的问题，是我最后提出来的DNA质量不好。就算同时裂解两份，最后的操作步骤还是一样的。所以并不是裂解的问题。

86964109

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, v$ y- a' t3 O  i/ f2 ^8 d5 X: `( [1 E) k- b+ l2 g6 \) N
我们沉淀DNA一般只用无水乙醇（DNA溶液：无水乙醇 =1:2），如果额外加的话会加3M醋酸钠（30μl），醋酸钠是正常溶解的，保存于室温或4度，能用好久

bb6120

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! P- l" I2 B" k. v: d  g( Q你们不是按照TRIzol说明书来做的吗？能给一个详细一点的修改后的步骤吗？先谢过！！！！

86964109

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! s! H; e) ?3 }& C* V有些记不清了，不过我们做的应该很简单，氯仿处理离心分层后，移去上层水相，用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。每使用1mlTRIzol加0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3分钟，2～8℃12000r离心5分钟。 4 N0 u$ k. s* x: [8 v
　　2. 移去上清，（如需分离蛋白质，可保留）用无水乙醇沉淀DNA。每用1mlTRIzol加入1ml无水乙醇，-20放置2h以上，2～8℃12000r离心10分钟，弃上清。
0 g$ K8 @5 X. \4 ]8 ]  T! Y. K　　3. 用75%乙醇再洗一遍DNA沉淀，每用1ml TRIzol加入0.3 ml75%乙醇，2～8℃2000r离心1分钟， 吸弃上清。
; J& ~' J- m7 r- _; O" J　　4. 室温放置晾干DNA 5～15分钟，用ddH2O溶解DNA。

bb6120

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! U0 l2 M6 X) K9 N% T' T9 P哦，谢谢啦！我按照你的方法再试试！！！真的非常感谢！！！！