DMEM的pH

wangzhiqi86

DMEM是常用的一种培养基，但是使用过程中会发现，随着时间的放置，pH会逐渐升高，最明显的就是指示剂酚红慢慢变紫。尽管配制的时候会加入NaHCO3和HEPES这种缓冲液，但是还是没办法。不知道大侠们有什么方法可以让培养基的pH维持在7.2的时间长一点，至少开瓶用后，在4℃能保持这个pH两周以上，谢谢！！

小呵呵

你可以放在二氧化碳培养箱中平衡一下。

wujh1986

可以自己配一些HEPES啊,看到培养基偏碱时稍微滴一些进去

ljs

我们实验室配好的DMEM，分装，标注名称、配制日期、操作者，开封日期，然后密闭4℃保存。每开一瓶加一瓶的所需成分，如血清，双抗，谷氨酰胺，理由是这些添加的因子有半衰期。在包装瓶上详细标注加入的成分，浓度，操作者，在给细胞换液，补液前通常会在培养箱热敷培养基。理由是1.避免冷应激（具体原理我不是很清楚）。2.培养基在不同的温度下PH值可能变化。个人经验，仅供参考！

wangzhiqi86

回复 小呵呵 的帖子& c5 F) w9 U" F; o8 R% ?  E
8 N  s  R  O- P) y! ?7 E
长时间放置的话，不能一直在培养箱吧，不然像Gln这种降解的非常快

wangzhiqi86

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4 P8 ?* P3 y% @7 U1 `6 g  ~# N. h1 ~+ G  X4 X) a' j1 X& B( ^
之前试过，加进去当时确实有效果，酚红变成橘红色，甚至都变黄了。但是没过两天，培养基pH又上去了。如果一直加的话，HEPES浓度太高，对细胞肯定有毒性。

wangzhiqi86

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但是一旦开封，就往往意味着培养基的pH会慢慢升高，因为NaHCO3分解后，CO2就跑了，不知道你们实验室有什么解决方法没？谢谢

ljs

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* a6 H; n& O; F# {/ s: R  L" h4 ]  t, c; U3 ^
楼主拘泥于细节，忽略了缓冲剂的离子的作用，无论方法如何，看结果。

wujh1986

回复 wangzhiqi86 的帖子8 j+ U/ j6 s( B" u8 k
: H& R. T- I1 T
那你如果非要这么严谨的话,每次你买回来的培养基可以自己先分装成小瓶,培养基用的很快的,一瓶培养基不可能那么快就变碱,而且如果要加Hepes,基本上中间加一次,那瓶也就该用完了.           如果真的你的培养基频繁的偏碱,那你培养基用的也不适当,给细胞换液或者传代,培养基才暴露那么短时间,不可能那么频繁的就偏碱了.

ditiger

两周应该没啥问题，除非LZ开盖时间太长了，滤点HEPES，看到变碱时，加一点。用完封口膜封上。