人脂肪干细胞培养----为什么总出现内皮细胞！

hanchao

本人最近提取过N个样本的人脂肪组织干细胞，但不知为何，出现过3次贴壁细胞为内皮细胞，并在3天换液后，内皮细胞增殖达100%融合。无奈啊，无奈啊。方案如下：请哪位专家给分析分析。。。$ q0 G  E7 o) r: D! m( Q
1. 获取脂肪组织来源不定，多数为癌旁组织( A6 ^5 N/ O% Z! w! v
2. PBS冲洗4 L* d* s4 V* z
3. 脂肪剪碎为3*3*3mm小块
9 G+ c" v* |0 M  ]0 E4. PBS冲洗至溶液为无红细胞的澄清色
4 {6 H3 P9 x0 E5. 弃去PBS
+ }1 h# T  m) C6. 加入与脂肪组织等量的0.1% I型胶原酶
5 T3 ]. ]* o' K" m$ l1 a5 u7. 37度水浴190转30min4 e+ p( }: Z+ |
8. 加入等量完全培养基种植消化
9 h; J2 s% y- |9 U6 N3 O9. 1000转10min离心
) i1 X+ p& q( G7 ]10. 弃去脂肪组织及上清) G* a! j* M" W6 y9 f
11. 加入5ml完全培养基重悬细胞! v' S4 `) D0 S8 B* s" o
12. 1000转5min离心
2 S5 Y# O0 \" U+ d13. 去上清，加入完全培养基（H-DMEM+10%FBS+1%AA）/ j$ c0 ~& P2 Y: S  h
14. 大约5ml脂肪组织接种25cm2一瓶。" k- m+ q+ H. x, W2 @
15. 第2或3天观察，就有少量成纤维状细胞贴壁，但仍有少量圆形细胞贴壁
+ g$ f5 _' n- l- K% s16. 待3d换液圆形细胞大量扩增1d即可长满。。。我晕啊。。。我晕啊。。。我哪错了。。。" u% y& `* U$ c1 ^( s# [
17. 经上网查询扩增细胞为内皮细胞形态。' b0 d  [- x) x5 S- X" \3 Z
哪位专家给我看看。。。为什么会这个样子。。。。。。。

细胞-77

有图片吗，可以传点图看看是什么样吗？

hanchao

有图片有图片。。。

hanchao

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' ]* k+ k; U6 j2 I0 K9 Z$ h! \9 w7 ~1 q0 V  M1 q& A
有图片。。。请欣赏。。。

jihaijie

来源有问题吧

willing

组织尽量去除血管后再剪。9 I0 n" U8 S# i* S. L

4 O. D2 a5 a6 r0 |. f6 M" z  y9 P! Y

ditiger

回复 hanchao 的帖子
0 z3 `- _! C+ m/ P  u; X4 W
5 O; ~/ s8 F  A4 \. bLz用的什么培养基？内皮细胞一般不好养的。。。

干细胞谷

怀疑你培养出来的是肿瘤细胞，换换正常脂肪组织试试。

wind789

脂肪干不是这样的。你是不是培养出肿瘤细胞了？

future007

我觉得还是来源上有问题，可能混进去上皮或是内皮组织了，不能选个别的部位吗？