脐带间充质干细胞形态求分析

huajie881026

养了几次脐带MSCs，细胞总是老化很快，前些日子也在版内发帖求助了一番，有大侠跟我说他一条脐带最多能传40代，这对我目前的状态来说简直是不可想象，所以想改进细胞培养方面的技术。在此麻烦大家伙指点一二！
' l) y# R. t& Z7 F. B! i; s: y/ [想请问：我用的是DMEM-LG+10%FBS+1%双抗，一定需要加bFGF吗？
% e; t) b% p: _7 F胰酶现在的消化时间控制的还可以，昨天看到有文献说用0.05%胰酶消化1-2min的，我又一次怀疑自己的胰酶是不是加多了。我一般0.25%胰酶+EDTA在T25培养瓶里加500-800ul，之前PBS洗了之后培养瓶里留0.5ml左右，相当于等比稀释胰酶，这样消化约1min，然后终止消化。
5 M- |3 \+ @+ [) i% w我想找出更多影响细胞状态的原因，求指点！
: c5 F8 T: E* i# m- P下面是我养的图片
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gghywtfz

我觉得最大可能是因为你使用的血清并非筛选过的血清。
+ U; x/ C7 l  W另外，可以在培养基里加进去2mM L-glutamin6 R$ u. ^& K, W3 j  s( m5 {
一般MSC对L-glutamin比较敏感。/ w  K& x5 t8 A8 h$ f

7 i% s8 \; o  \$ @0 I7 N

willing

我养脂肪间质干细胞有同样的困扰。。。。求解答。。。

ind6562

如果你想让细胞活力更好，最好加加bFGF。  f' w" |5 o4 B, `- y
把种瓶密度调点，间充质细胞要保证细胞间的接触活力才会好。当然原代细胞不好调整密度，但你可以早点传代，不一定要等它们长到80%的汇合度，你这一等，细胞可能就老了。

ind6562

不好意思，是种瓶密度调高点

SKC-SFC

从你的细胞图片来看，并没有多老，属于正常情况

huajie881026

回复 ind6562 的帖子( q1 Z1 z$ @& |  W5 W. N8 x. k# d
/ `* F$ n/ X/ `# F
我一般是5000-10000cells/cm2，5天左右可以传一代。8 R  p+ L: \/ W6 d
bFGF是重组人bFGF吗？

huajie881026

回复 gghywtfz 的帖子
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) D2 E9 ]; L! F* F2 T, H2 F我用的是GlutaMAX，长效的
2 J3 [, e0 e+ k  u+ M, D5 z! g血清的话的确是没有筛选过的血清，请问哪个公司有适于这个细胞生长的血清呢？

流泪的鱼

你中和的方法考虑到了吗？这步是细节，也很重要。我以前曾经犯过小错误，导致传代后的细胞长势不好，好好注意实验的每一步骤。

ind6562

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0 O6 d# N  H( v: Z3 f; }' @* s. _; S& I6 l. t2 |; V: l! q$ |
我们一般种的密度是500000CELL/T25培养瓶，这样算下来是20000cells/cm2，你的密度我认为是偏小了。
0 Z/ D! n$ n5 S我没用过bFGF，有同学用的说是重组人bFGF，但你买之前应该自己先了解下。