请教专家：hiPS复苏问题。

frankieisme

回复 pingzongyunlan 的帖子! \' Q. f& V2 H( Q0 P0 r
, U; R* W3 S2 T1 z  y7 }: l
你是有feeder培养还是feeder-free培养?复苏的培养液就是你平时养hiPS时用的培养液.复苏的时候不要用力吹打,以防把细胞块吹打成单个或者更小块,这样不利于细胞的复苏,容易导致细胞凋亡,这也是加Rock inhibitor的原因所在.其他就看冻存细胞的状态了.

也行天下

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3 s; s5 Z& T$ p$ w, R! M6 [2 e& S9 ^  e( j
前边也提到了，我用的是mTeSR1无滋养层培养液。复苏时你加ROCK抑制剂了吗，能很大程度的提高复苏效率。

也行天下

回复 frankieisme 的帖子. H: R2 U0 \+ l: m, |6 Y) m

5 E; l' N. P4 p* D请教一下，冻存时细胞块太大会不会影响复苏效果啊？

pingzongyunlan

回复 也行天下 的帖子! F: A) ?. \* u& S6 g& R

9 E' \" I( }' v5 @* ?我没加ROCK抑制剂，只是用之前用的培养液，也是feeder-free，我得试试你们的方法~谢谢！

pingzongyunlan

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* Z& J  A+ D- W  P: j1 o) o2 G6 O
我好像明白我错在哪里了，谢谢撒！

frankieisme

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# W+ M  d% m3 n3 q2 M0 O: _) P影响不会太大,但复苏后大块细胞很容易自动分化.

也行天下

回复 frankieisme 的帖子* k3 t8 |- n: Q# ?+ {0 N

0 `- N( |/ m+ r: c, {3 E我们有两次复苏hiPS细胞都没有贴壁，也加ROCK 抑制剂了，和以前复苏的区别就是细胞团块大了些，以为是这个原因呢当时想是不是细胞团块大了影响细胞冻存效果。那就得从其他方面找找原因了！

lchanlon

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4 l, \9 w" d2 E  N
" h( V* ]/ \4 Z/ e0 J! k+ P5 dMaybe is the problem of your cell stock or something wrong with your cell freezing protocol. I recovery human ips cell from liquid nitrogen with ROCK inhibitor. You know, ROCK inhibitor elevate the efficiecy of live cell, but it promote ips cell differentiation. So i usually remove the ROCK inhibitor 6 hour after cell recovery. Actually, someone removed it 2 hours after seeding. The cells already attached on the plate in 2 hours.

vae有何不可

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+ ~* r' C$ C. ~# G/ ]6 V4 ~0 h( I  `. a2 U% [9 s
我感觉任何一种细胞的复苏之后能否很好的贴壁以及较好的传代都与很多因素有关，包括复苏时冻存细胞在水浴锅里的解冻的时间，复苏时培养液的新鲜与否，干细胞还要看下贴壁的饲养层细胞的状态等....个人见解...

也行天下

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# m7 a2 O! C$ M) f( J* ^. z+ y& [- ?9 \- A5 g
谢谢！