关于慢病毒转染人脐带间充质干细胞的问题。polybrene、MOI值

quge_00

最近在做慢病毒转染脐带间充质。有做过的，请教一下。
0 k# ]) s4 s2 l. w( u- B$ ]9 ~4 ?1、包装细胞接种第二天融合达50%，文献有报道到70%再转染，50%效率是不是高些呢？
7 A  H  k" X  f- X& Z$ Z2、为什么要用无双抗的培养液配制病毒液呢？; _! \  _+ \3 U9 I) A0 P
3、转染前用293细胞测滴度不？' H" a& I# o+ b2 s
4、文献报道MSC使用慢病毒转染MOI值比较高（10），并且同时还加入了polybrene（8ug/ml），请问您操作时加吗？还是自己梯度摸索呢？* E8 `1 \$ ?0 M, ]1 [! S, c

3 I% p: ?. M! f  y& r
3 N: E5 h# H8 b- w: k! B问题很多，见谅啊~~很是头疼，因为做了一次，没有明显的转染阳性的。。。。

jhu132llh

1.50%和70%效率上差不多，到那时50%的更方便一些，因为慢病毒表达比较慢，一般是转染后2-3天才筛选的，所以50%的要好一点的；
& i! _3 Y( Q' e; e( W9 k: f9 J2.理论上，培养液含不含双抗和相应的生长因子对病毒是没有影响的；有的时候，慢病毒转染还是使用完全培养基的；
* L/ I$ Y/ r1 Q: @* a- T& z. Z3.一般在纯化慢病毒的时候就已经检测滴度了，所以一般是不用重新测滴度的，除非病毒在-80度冻存超过8个月，一旦冻存超过8个月，最好是重新做个滴度；
' T; K3 E' K9 P+ A8 t8 ~2 r4.可以做个梯度MOI，所有人的MSCs都会有点差异的，所以条件不能完全通用，所以最好是做个MOI梯度摸索一下最佳条件；7 Z2 ]* O9 e6 b! j5 P& `! U  {) M) t
5.polybrene是一种带正电的小分子，可以有效中和细胞表面携带的负电荷，有效提高转染效率至10倍左右，可以试一下不加和加，然后加8ug/ml和6ug/ml两个条件；

chentian820

就我最近的经验分开解答。# O  I% c; o9 C7 X0 |
1 293细胞密度在50-80%均可进行包装。包装效率最关键的还是包装细胞的种类和转染试剂，如果你的包装细胞用钙转不理想，建议你直接用lipo2000转；$ w, V" ?/ Q" {$ y6 e
2 我的培养基里面是加正常抗生素的1%。有的时候也不加抗生素。其实抗生素影响的主要是你的转染效率，而不是直接影响病毒的活性。
- s- J2 }5 \, Q- |$ u: {" ?  F3 不用测滴度。测的滴度也是相对滴度。仅作为参考。
2 m$ P8 |9 @9 p" {% g! L4 我使用的polybrene浓度是10， 感染后12h换液。

quge_00

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  W3 g5 [, s4 ]0 Q5 u多谢解惑啊~~~

quge_00

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学习了啊~~