关于红细胞裂解液

fenglinzhu

如果所要培养的细胞中含有大量红细胞（大概是所要培养细胞数量的1000倍），是否需要用红细胞裂解液裂解掉红细胞？红细胞裂解液对细胞伤害大吗？

shy8610

绝对需要裂红，控制好时间，细胞离心后，在15ml离心管中，4ml裂红液，3-4分钟，加入含血清的培养基中止，离心收细胞，如果没裂干净，可以再来一次。至于裂红液完全可以自己配制，高压灭菌即可

fenglinzhu

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  S1 w2 a- F% a# W* {. }' v5 Z' m如果司冻存后的复苏培养呢？也要离心吗?离心后直接用加红细胞裂解液吗？这样多次离心会不会影响细胞的活性？我们之前用还能干细胞裂解液裂解后培养，发现贴壁的细胞都很少，基本没有。

shy8610

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; ~. s8 U5 F& w5 m冻存的细胞能力是会差些，但如果不离心浓缩，是无法裂红的啊，多次离心不可否认影响一下细胞活性，但是也是个去伪存精的过程，你之前发现贴壁细胞少，其实也不打紧，只要状态好，那就收缩体积，使之更密集的培养，慢慢扩增

fenglinzhu

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您的意思是加大培养密度吗？

shy8610

回复 fenglinzhu 的帖子. f# R. B, C/ {- h; ^
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是这样的，原先t25瓶子，你用5ml培养基，你可以先用3ml，，要是有条件的话，用2cm的康宁的小皿养，慢慢扩

fenglinzhu

回复 shy8610 的帖子) t* D+ z1 y% M+ e# I. ^

' m/ a5 R' `2 E/ R; b' c' d& j 受教了，谢谢

crystal_xjw

如果是这样的，裂红是必要的，但是会对正常细胞有损伤的。我倒觉得不如在培养前就分离干净些，没有红细胞后再培养，这样不是更好？

lousia04306

当然会有伤害了 ，控制好就行

romanyuo

要是干细胞的话，可以先密度梯度离心，然后用培养基贴壁培养筛选，去红细胞的效果也不错！