转录组cDNA文库电泳为何这般？求解

l19rna

回复 dahui 的帖子8 E( Q" I- S- i+ H  V9 ]4 _# Q
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呵呵，很感谢您的建议，但是5 i( b% q5 \( \( S% \
1.跑最前面的确实是引物二聚体，因为我们用的引物是文库构建引物，根据实验引物长度和经验得知的而且前面2条亮带都是引物；% ?7 X  p# f1 ^* l
2.我们这个是单细胞扩增的cDNA文库，不可能提取RNA的；
5 l, B; f+ ]/ U: O9 y& H& p1 `3.这是我们要切胶回收的cDNA文库，不可能跑很开，否则我们回收体积巨大无比，而且容易丢失，所以我们不再延长电泳时间；
  H& J+ X# O: K  N4.我们切胶回收后再跑电泳，确实不会出现弥散条带两端亮的问题了$ }- z  p- `" F" @5 G
5.跑胶之前我们是检测过浓度的，260/280>1.8。* }. y  l- i0 q0 H% S6 L
6.我们没有用EB染色，因为实验室已经不用EB了，希望有条件时候可以试试
: I) V2 [& D. {( l0 p( G7.或许“weiyepan”说的对，样品粘度很高，因为我们加的loading buffer里面加了非常多的甘油以沉淀样品防止样品电泳上样时候漂了，但是实验室以前都用同样的配比做的，不会像我们跑的一样，而是中间和两端一样亮* x! A8 `# Y" E: Y. G% ]% Y
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l19rna

回复 weiyepan 的帖子
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嗯嗯，回去了我试试，减少甘油浓度

l19rna

回复 shy8610 的帖子7 a4 C" B( L. d7 m1 W: O0 @

$ w, x: y/ K) S其实，我们上样量更大的时候都有，都不会这样子，回去了我也换用EB试试，maker只能跑这么点，我们还要切胶回收文库的，呵呵

dahui

回复 l19rna 的帖子$ H5 a9 T. d, Z' N2 ]

4 ^7 T5 Z* X! D! D& `: M学习了，谢谢