骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下
: L# F6 Z4 z8 n9 }' T1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；# p! \4 z  U6 S* M9 Y+ A
2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；
  d7 j9 u7 V+ s1 f+ C3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加
, U# s! }3 Z0 \4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；
+ W: l+ i4 }/ c0 D& `5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。
9 \" j1 q( i/ e+ H; t2 }各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

wcforever126

人气不高啊，看完整个帖子，基本没发现关于人骨髓间充质干细胞方面的，故发此贴。

wcforever126

小弟刚开始做，可能好多写的东西不对，望各位前辈指证。
4 D  H6 |% M& x! c首先从分离细胞说起吧，
4 }* p; }( o! W$ U, ?8 C我们实验室主要用F-P 1.077分离骨髓间充质干细胞，主要步骤如下，
' |$ k8 f7 I& q& V1、骨刺5ml病人骨髓液，等比例PBS混匀；
; h8 B6 P2 x. h4 u2、F-P比稀释后骨髓液1:1或1:2，一定要小心
& C3 f/ c& y% q) k3、800g。20分钟，20度6 h3 k, x7 ~  E& {6 a0 U& h+ b% v
4、白膜层，稀释3倍体积的F-P体积
; m# d; {% j0 m; o5、300g,10分钟，4度，重复一次6 h* o7 f  f+ m7 d
6、接种密度5*10的6次方。

wcforever126

今天说下无菌观念吧
6 t% Z- \& P& l. }1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；
/ ~' S7 z$ F  B2 n3 D" ~4 h2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。
' [! f; G1 w5 G: i2 ]3 Q3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。
, o0 G3 |/ ^( s% {4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。

wcforever126

关于接种密度问题7 @6 o" j, {( f
1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种& e# V( m; [# B# `# ]9 t" L
2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

回复 ffkkk2007 的帖子8 F7 w0 Q6 F' k* B1 P) J+ \1 e
% a  W! W) L7 m% o2 K: ?% k5 g
有利于贴壁，最好用进口的。

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

细胞海洋

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