细胞养了2年了，没碰到过这样的情况，大家帮帮忙吧！

yuhaoze

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9 O; }" V! A  j) l. u1 m& t7 S+ s9 ~最近养癌细胞，出现问题：以前的做法是，加上胰酶洗一遍，再加胰酶消化，一直到漂，然后终止消化，细胞状态很好。现在同样的做法，不管消化多长时间，细胞都贴在那里不往下掉，一吹打细胞就碎，没一个活的。
( a: b5 ~& W1 m: f$ ~9 h; C不知道问题出在什么地方，怎么解决
' C) f) z( N4 H! n; V& `% F大家有没有遇到同样的问题

coffee.cat105

你用的什么公司的胰酶、

yuhaoze

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/ \! x& A0 V0 J1 u4 A) T0 j
& l9 ]2 L1 Z0 j+ _5 lsigma,一直都是这个，你觉得是胰酶的问题？
- g+ U7 J6 A" b2 s! j' @! N2 r# \; F

yuhaoze

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* X) S% d' \  {" w
! _7 D8 v3 F. a加上之后倒还真是能看出来有点类似凋亡的特征，但实验室其他人说胰酶很好用啊

coffee.cat105

我们用Hhclone的胰酶也出了问题了，形态什么的都可以，就是流式检测抗体标记不上，正头大呢，所以问问你: l: g# U, f8 E$ ?- L" _

WAX

你的胰酶是不是粉末自己配制的，如果是，有可能是过保质期，胰酶失效了，消化能力差，损伤了细胞却消化不下来，我们以前遇到过类似的情况

yuhaoze

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: S2 U- a: C$ @) O" @
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# m7 I: _; T8 g7 U如果是这样的话那真需要警惕了

WAX

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# @) F8 \2 b3 j  R2 q( E: l
8 f1 F& p) f0 h$ O- Q+ z" j粉末也是会过期的，用个两年就差不多了，买一瓶新的吧

yuhaoze

回复 WAX 的帖子/ @3 s4 ^9 b5 R/ m$ b

9 y/ l0 s. p- U, I2 k好的'谢谢

wangzhiqi86

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4 O4 Z& T! ^' F" a3 o, q* Y5 ~0 q4 F6 V$ w- @, f
极有可能是胰酶时间长了之后失活所致，我之前也是在37℃预热时间长了之后细胞怎么也消化不下来，建议你再重新用胰酶粉末再过滤配一瓶试试，里面EDTA也要加的。
3 C; I) Q: ^* @2 Y8 k我的经验是，每次预热的时候，胰酶最后预热，不要超过5min，甚至可以放在室温一段时间就行。很多胰酶并不是在4℃放的时间长了失效的，而是经常性预热失活的。  t+ O1 ^# J' U" R4 G2 l
胰酶用的是Invitrogen的，一瓶粉末可以用很长时间。配成2×的过滤后分装冻存在-20℃，用的时候再解冻，一个月内没问题。