293T细胞团中央黑色不明物

telomerase

铺匀的方法有好多，个人有个人的2 F" t' ]( Y7 W: ~
1、晃板子，就是前后晃完，左右晃，然后突然停
; j* W) p' U! S2、先湿润板子，然后铺: X; J3 v$ R$ E3 D' c# y; C
3、直接铺，然后用枪头吹
3 O0 O2 k0 h$ W1 C( u5 I& R  Z; }: `4、完全消化，直接加入，铺满底面就好
( \. X6 ~1 j- T, [
$ n5 G% T5 f3 C2 ~
" v: }7 ~1 n* n这几种我都做过，但我比较喜欢第4种3 J4 d! E  _0 Y( G0 z  v2 o6 D# L9 a, y
你得找到你自己觉得好的方法，这些是和各自的手法有关的，没有绝对的东西

telomerase

不加双抗的
: Z0 r! }5 \& F5 F% U2 [) E1 J+ L转时可以用有血清的培养基，但混合质粒和lipo的最好用减血清的opti mem

telomerase

转时不要加双抗，对细胞不好+ D! Y2 L9 N& V5 v# _; h
如果6h后换液，再加不加双抗没关系了就

sizhengliu

回复 telomerase 的帖子+ I2 d' E$ H$ F& S5 y* \9 e9 W

+ I* ^% ~9 q  q6 S% ]8 P( ~7 \4 M多谢指教！

huangcong1988

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6 t5 t5 i1 u, F% N( ^! o$ t5 Y3 l5 `) c
个人觉得是消化传代的时候没有吹打均匀，然后传到瓶里没有摇匀，这样细胞很容易扎堆，导致细胞形态不好，还有你的细胞哪里的？是不是传代太多了？

wcfeng88

回复 sizhengliu 的帖子! K/ [+ k5 `* A1 c  i

! h2 l+ e% o/ V6 t3 U- y放置几分钟，细胞仅轻轻贴壁，你拿起放到培养箱的时候的动作肯定会把它们晃起来。你可以让它们贴个半小时让它们贴壁比较紧之后再去动它，或者直接在要放的培养箱里按照常规的方法晃匀后就不动它了。

wcfeng88

回复 sizhengliu 的帖子, x2 |7 S/ c5 O; m1 ?& i6 `
% Q% ~7 d- O1 M  h, e
质粒转染的时候不加血清，一般转染4小时之后把含质粒的转染液丢弃，再加入含血清和双抗的培养基培养就可以了。

sizhengliu

回复 wcfeng88 的帖子) m9 @- N* `/ g: _# q

/ j6 [' U0 B: n) {6 u谢谢！

sizhengliu

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- ]7 e+ {& d0 J% O1 u
/ b/ r0 u  @0 R* u$ v谢谢！我下次试试

sizhengliu

回复 huangcong1988 的帖子% C9 I# _! K& B) ]( L7 u

- L3 k( r3 x$ U7 G& P: J9 y我把细胞直接复苏到孔板里，或许这样太急了吧，以后可能会先在瓶里传个1、2代。