293T细胞团中央黑色不明物

telomerase

铺匀的方法有好多，个人有个人的
8 V: j5 A8 k3 m) c1、晃板子，就是前后晃完，左右晃，然后突然停
" u/ D4 f$ w" m! k7 V* @8 w, {2、先湿润板子，然后铺
' r, D/ L# G  W5 D3、直接铺，然后用枪头吹6 M1 B  o# P- z
4、完全消化，直接加入，铺满底面就好
8 z) `( ]1 t/ M- Z7 l  W- P4 N6 G( a* z: l' l1 V

/ |1 Z1 l; d4 M2 }" b. B这几种我都做过，但我比较喜欢第4种1 }7 k8 a, Z$ T) l
你得找到你自己觉得好的方法，这些是和各自的手法有关的，没有绝对的东西

telomerase

不加双抗的7 x. q8 ^( @4 K. \( T2 y3 u/ b
转时可以用有血清的培养基，但混合质粒和lipo的最好用减血清的opti mem

telomerase

转时不要加双抗，对细胞不好' _4 R$ g$ S) R' h+ t4 Z
如果6h后换液，再加不加双抗没关系了就

sizhengliu

回复 telomerase 的帖子0 q0 B  j" G) ]  L% Q4 h$ j% Z

. a8 H. `) {4 J多谢指教！

huangcong1988

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8 _# ]# c/ H; a  f/ ~3 @# q2 t6 K+ Q3 ]7 R
个人觉得是消化传代的时候没有吹打均匀，然后传到瓶里没有摇匀，这样细胞很容易扎堆，导致细胞形态不好，还有你的细胞哪里的？是不是传代太多了？

wcfeng88

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, u/ @+ G( z/ i$ f$ D8 I# ^9 h! C' H, @6 g) A1 E* ~# R
放置几分钟，细胞仅轻轻贴壁，你拿起放到培养箱的时候的动作肯定会把它们晃起来。你可以让它们贴个半小时让它们贴壁比较紧之后再去动它，或者直接在要放的培养箱里按照常规的方法晃匀后就不动它了。

wcfeng88

回复 sizhengliu 的帖子( x$ B; F1 b/ f# m+ p

0 k9 j7 Y6 i: E; k& B质粒转染的时候不加血清，一般转染4小时之后把含质粒的转染液丢弃，再加入含血清和双抗的培养基培养就可以了。

sizhengliu

回复 wcfeng88 的帖子6 {& g7 |1 \+ z) \
- J5 ~- W. S" i, ~& W$ q/ s
谢谢！

sizhengliu

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& D' T. C- u3 g1 q2 p5 z: z  j, x/ h( d2 V3 P! T6 \7 @4 S" r$ L
谢谢！我下次试试

sizhengliu

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# a9 o. h& i, A% `+ ]$ |) H5 [! ^2 V: k7 t" \+ t
我把细胞直接复苏到孔板里，或许这样太急了吧，以后可能会先在瓶里传个1、2代。