第五届全国肝病免疫和生物治疗研讨会总结和体会(二）

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   302医院的张政教授对HBV感染中免疫细胞介导的肝脏损伤机制的相关进展进行了介绍，在其团队的对急慢性乙肝队列进行的系统研究结果发现：在急性HBV感染中，PD-1分子动态调节病毒特异性CD8T细胞功能和CTL形成，密切相关于乙肝病程进展，而在慢性感染过程中，DC功能降低、PD-1分子和调节性T细胞上调共同导致特异性CD8T细胞功能低下，后者是至病毒特异性CD8T细胞功能损伤时HBV持续复制的原因。同时肝内非特异炎性细胞Th17细胞等大量浸润式肝脏损伤家中的重要原因。特别是慢性乙肝患者体内的NK细胞，受到IL-12、IL-15等因子作用，杀伤力明显增加，而分泌抗病毒的IFN-g能力却无显著变化，因此导致肝损伤不能有效清除病毒。这些研究结果对阐明乙肝的发病机制、建立乙肝的免疫治疗策略提供了方法和依据。$ h- H7 {6 ^0 s# Q, p3 D
   第三军医大学第一附属医院的钱程教授指出慢性肝病肝硬化和肝癌严重危害人类健康，生物治疗肝病尤为重要。生物治疗包括基因治疗、细胞治疗、重组蛋白和单克隆抗体疗法。肝癌的基因治疗目前成功筛选出三种有效的肝癌基因治疗的方法，携带白细胞介素-12的腺病毒载体AdhIL-12，携带自杀基因tk的腺病毒载体Adtk及AdhIL-12修饰的DC细胞。而细胞生物治疗作为新型治疗手段所取得的疗效也已受到人们的重视。内皮祖细(EPCs)胞是一种具有双向分化潜能并可参与血管损伤修复和具有组织修复功能，其团队研究发现，在肝硬化发生过程中，组织损伤释放的趋化因子能有效募集EPCs进入肝脏。EPCs对多种因素引起的肝损伤和肝硬化具有保护和修复功能。EPC是治疗能显著降低肝硬化的发生，作用机制是促进肝细胞再生和组织修复、抑制星状细胞活性和减少ECM的沉积和血管新生，导致正常肝组织结构的重建，临床前试验结果表明EPCs治疗肝脏疾病是安全的，提示EPCs是治疗肝硬化等肝脏损伤性疾病的理想治疗细胞。对肝癌的细胞生物治疗，由于肝癌患者体内存在免疫抑制环境，治疗细胞功能的发挥受抑制，治疗效果有限。
2 Q5 l. p6 w" j7 |. b( [4 q       解放军总医院肿瘤中心的郭亚军教授对肿瘤细胞免疫治疗提出了全新的治疗策略。目前，肿瘤细胞免疫治疗是继手术、放疗、化疗三大传统手段之后的第四种辅助治疗手段，可以清除肿瘤残留病灶，减少肿瘤复发。郭教授及其团队在经典的细胞治疗方案的基础上建立的新的细胞治疗策略，并进一步在肿瘤模型上进行了验证。他指出目前提高肿瘤免疫治疗的方法主要有：1、通过各种方式提高肿瘤细胞的免疫原性2、使某些在肿瘤细胞上低表达或不表达的共刺激分子表达3、通过基因修饰的手段来提高肿瘤细胞的细胞因子表达量。而今后的发展方向应为：1、通过体外添加某些特异的传导受体来提高T细胞的致敏效率；2、通过对T细胞的基因修饰（如CD3、CD4信号途径）来提高T细胞的活化；3、增强DC和APC细胞的功能；4、在体内通过抗体介导的一些技术来靶向性传递抗原。其课题组主要进行的研究为1：靶向肿瘤抗原并提供共刺激信号的人工T细胞受体。他们选择了Her2分子为研究的肿瘤相关抗原，构建了抗Her2的单链抗体的嵌合受体分子。并转染小鼠，结果显示转染后的T细胞可以显著杀伤Her2阳性的细胞，对于Her2阴性细胞没有作用。证明抗肿瘤作用是Her2特异性的；治愈后的动物继续接种Her2阳性细胞生存率仍为100%，接种Her2阴性的肿瘤细胞，生存率也可达70%，结果证明嵌合受体T细胞治疗后，宿主产生的抗肿瘤免疫反应不仅针对Her2抗原，对肿瘤细胞的肿瘤抗原也可产生保护性作用。2：抗体-CD40嵌合受体修饰的DC。DC能够活化静息的CD4+和CD8+T细胞，机体免疫过程中最重要的APC,CD40的共刺激信号在DC的活化过程中发挥重要作用，将Her2单链抗体与CD40构成嵌合体转染DC，修饰的DC可以被Her2阳性的肿瘤细胞直接活化，诱发机体的抗肿瘤免疫反应。实验结果显示：修饰的DC在Erb刺激下，NF-κB家族的p50、Rel-B和c-RelmRNA的表达显著增加，在Her2阳性的D2F2/E2细胞刺激下，MHCI、MHCII、CD40、CD86等表面分子及TNF-α、IL-8、IL-12等细胞因子的表达均高于对照组；对Her2阳性的D2F2/E2细胞杀伤效应显著强于D2F2。静脉输入嵌合受体修饰的DC，在肿瘤局部及引流淋巴结均有明显的聚集，肿瘤局部DC的MHCII、CD86等标志的表达显著高于对照组。修饰的DC通过特异识别靶抗原，从而在肿瘤局部聚集活化高表达CCR7等趋化受体，迁移至引流淋巴结，继而刺激活化静息的CD4+、CD8+T细胞诱发机体的特异性免疫反应，抑制Her2阳性肿瘤生长。3：体内靶向递送肿瘤抗原：通过一个结构类似抗体的重组蛋白达到最终目的，其作用机制与DC密切相关，携有肿瘤抗原的抗体分子识别DC表面的受体，内吞DC，通过DC的抗原提呈过程，将肿瘤抗原提呈至表面，刺激活化CD4+、CD8+T，诱导机体的抗肿瘤特异性免疫反应。
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