ips诱导和培养中的2个疑问

sizhengliu

各位大侠！小生有疑问，多多指导：; x( l, I+ G, ~5 g$ T' z1 b
1，关于血清：在ips的诱导重编程阶段，克隆还未出来之前，这段时间可以使用胎牛血清吗？（gibco的澳洲血清）这对感染后细胞的增殖有无帮助？对克隆的出现和形成有无负作用？
5 O# ~" I* ~# {+ e- Y- Y4 G& k2，关于筛选：在细胞感染病毒后，需不需要进行药物筛选？在克隆形成后，需要怎样筛选合适的克隆进行扩增？
6 x6 A3 X- g4 v/ Q# ^& M5 K& O0 ^1 e

frankieisme

1.诱导重编程阶段中血清是必须的;/ s" t: P! v. |* r' H, x: t& U8 I. c
2.在细胞感染病毒后，需要G418和嘌呤霉素筛选各一次,在克隆形成后不需要筛选.

huangcong1988

回复 frankieisme 的帖子
6 h; q, z! l( N' U
  [1 J+ _* J0 [8 {5 t2 M1.克隆未出现之前一直需要血清么？不是感染的时候（两到三天时间）含血清，之后换干细胞培养基么？
' Y- @5 P3 C2 s3 [- Q7 l

huangcong1988

回复 frankieisme 的帖子
. k1 J/ c% Q5 g. E1 Q6 ^- h# S( e) i. o: F
还有就是，血清的作用机理？

sizhengliu

回复 frankieisme 的帖子6 w. }6 Q+ e- c) X/ u8 ~3 L
4 o/ X3 \( F6 C; Y7 L
1,胎牛血清最晚可以用到什么时候换?
/ z5 ]9 Q9 ~7 Q2，感染后，嘌呤霉素筛选可以终止的条件是什么？* E1 l4 n) x: {
谢谢！

frankieisme

回复 sizhengliu 的帖子8 I( U5 H2 a: d/ i# C* M& x$ [* \; }
) \; Z$ v+ \; m- ?
不管是FP medium或者ES medium都含血清,只不过前者是10%,后者是15%;/ }/ Y( ?. D+ @4 T9 R
嘌呤酶素一般在G418筛选后第4天用,只用一次,之后就每天更换新鲜的ES medium,等到克隆长出来.

frankieisme

回复 huangcong1988 的帖子$ j# k' @7 s5 w: M. |

# }4 u1 g5 P" m$ u$ M# M$ aES medium中也含有15%的血清啦.

zmm

回复 sizhengliu 的帖子/ y' C* R, H& l7 n" W; Q$ v

6 Z: x, N+ o  c  v" D您的细胞是什么物种的？细胞感染后我一般不筛选，而形成克隆后，用活细胞染色进行筛选！

huangcong1988

回复 frankieisme 的帖子
. s6 L$ q- o: b3 @
! n" G* k) z0 y: j4 @  a您是养小鼠的吧？

huangcong1988

回复 zmm 的帖子
$ V& }2 A2 K! |8 M8 V5 j5 P9 r
# k6 s5 }/ f- N染色之后克隆还能用么？