人胎盘间充质干细胞问题？

hhxxattxs123

请问组织块培养法长不出细胞来是什么原因，还有就是组织块容易飘起来？人胎盘最好是新鲜的对吗？有人培养这个细胞吗？有的话可以介绍下您的方法吗？谢谢

grape

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- W% M; G0 ^  c+ ^组织块容易漂起来一般是因为干烤时间不够。一般要烤1-4h不等。不知你目前烤了多长时间，再适当延长时间试试。
2 C2 e. G+ b$ ^! u; d还有，将培养瓶翻转平放的时候要慢，以免液体冲击组织块导致漂起。* }/ }: Z: u, ?
人胎盘当然最好是新鲜的，离体时间越短越好，最好不超过3小时。) r2 R; v7 G& s' |( K* I
我们一般用人脐带分离MSC。, o  b# d& u) o' D% u! y
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hhxxattxs123

谢谢哦，我的是用培养皿，用的是羊膜组织，就是剪碎了，也没有酶来消化就贴在皿上，等了20分钟就加培养液了# P/ _/ T- n. F4 i! t
时间长了，怕组织细胞死亡。

单个核细胞

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& x( n0 _( U0 n. u
  t' w3 i& h( b& J) }1 L你可以先试试脐带华通胶组织块贴壁，熟练之后再行其它胎盘组织来源间充干的培养，贴壁时间适当长一点，然后再加入完全配液，这样有利于组织贴壁牢固。另外，也可将培养瓶倒置加液，待3-4h之后翻瓶，使培养液缓慢流遍组织块周围，然后放置培养箱静置培养。: j7 c# w5 \. g; ~, X; k/ d

1 r8 H# R9 N) D3 l9 L5 {: S参考帖子：
7 X! n2 R3 ^6 [7 r  t7 J' E" @- b脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：
* }8 |& E4 A$ j& khttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html' ]! y9 J# b5 B1 b( G+ K7 w& _
请教华通氏胶的剥离：
( u* w' P. ]$ R. l" [http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
: C# T2 U( ]! D; ?8 H" v  m应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：
. K! n5 b! n* y& u0 \2 fhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
8 n% Y4 W  ]/ o! ?脐带间充质胶质的备置：, n' r% O# [  z* T$ n) Q. E
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
. C7 h# ^# J: M& I% E& f脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：# `+ R  i4 M( B% o7 d5 p
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
6 ^( @+ @" U6 _4 U* r6 A/ O脐带间充质贴壁法到底几天换液：: U, X& i9 O* n' z; L3 I) ^5 e
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html6 Z1 |1 v8 q# q% F! c( h( T

* q( Z0 P* Z5 p" e9 R5 R参考文献：
, w3 T4 O% D5 X8 ^+ `& d  w

单个核细胞

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/ J# j5 K! ~. G, I) z回复 hhxxattxs123 的帖子
) K/ p3 K$ z0 Y5 E! [9 p) o8 s
2 |9 C9 M* \4 e贴壁法培养胎盘组织时，可取小叶，尽量清洗干净（去除红细胞），然后充分剪碎，可用吸管进行贴壁。贴壁3-4小时候（可以过夜），补加完全培养液，加液和转移的的时候务必小心，不要让培养液剧烈震荡，避免组织块漂起，培养箱静置培养，以后观察时也需小心操作。& Q# ]9 V  B! h; |

8 [1 Q4 Y1 P. v, Y羊膜操作比较困难，太滑，不容易剪碎，其粘性不如华通胶，这就导致贴壁后很容易漂起，可慢慢摸索。

xiaolong

回复 hhxxattxs123 的帖子4 P% U; {1 g0 B  N! S7 u& i
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20分钟就加液时间太短了，1小时试试，可以参考一些华通胶贴壁培养的文献中贴壁的时间

hhxxattxs123

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/ A2 r5 Y3 e( `! c
6 D  b% U& X2 H+ L非常感谢啊，我最近在用你的建议来做，效果比以前强了呀，

回到从前

建议你还是选择胶质多的地方贴块，块尽量别太大，倒置2小时以上 应该可以 我们做过 就是细胞比较杂

sailree

说一个简单点的方法，在100mm培养皿中加上2ml培养液然后将处理干净的组织放在这2ml的培养液里，然后用剪刀剪碎后，平铺开放培养箱24小时后补液至10ml，一般约5-6天半换。10天开始观察细胞，并全换以后3天换一次液。

院士站

是不是加液太多