求助，MEF卷边脱落！

ligangtiancai

我的CF-1 MEF在原代后4天半第一次传代，一传三，传代后第二天观察细胞贴壁良好，形态也不错。但第三天去观察时三瓶细胞镜下观察均出现卷边的现象，肉眼观平底皱褶，平底边缘整个细胞层卷边并有脱落（是nunc的t75 flask），做了这么长时间MEF第一次出现这种问题，请大家帮忙分析下原因，谢谢！

zpzp0312

原因很多% C! U( g& Z, H, h
1，geltin包被不好
- L2 G" n- |) x- D9 c  {2，饲养层太密: U8 P& g- \' Z  g- h2 W( y
3，换液温度和ph变化较大

ligangtiancai

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: i/ J$ C/ q5 r+ K0 ^) q* D: C0 r* D6 S' t
1. MEF 培养应该不需要gelatin* q5 K0 b' ~3 v) T( {" c% B
2. 我做的是MEF传代，还没有铺，
" `' J) p' v  u+ G5 G! s. S3. 换液后第二天一切正常，第三天出现以上情况。

genedu

我也遇到过这种情况，现在总结大概有两点：最重要的就是细胞密度太大，建议1传10都没问题，1传3有可能密度太大。2.温度落差太大，培养箱的37度到外面换液，假如液体没有提前预热，有可能卷边

ligangtiancai

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( o' z: Z0 s- b: i- [1 ^, q# Z- z: g1 A% W' l8 H' U& m
好的 可能是密度太大了吧 请问这种情况下细胞传代后还能存活吗

ligangtiancai

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( v; ]8 v8 y) \2 n0 B
; `; J. R$ ~0 T1 c3 B' O今天又去观察了一下，MEF几乎全部卷边，而下面还有一层，不知是否是因为太密而脱落。

zpzp0312

回复 ligangtiancai 的帖子* N; p2 j6 X- X) p; E
3 A' P+ y1 C; I$ u/ J/ e1 y2 ^
如果消化继续培养，是可以存活的4 u- F; [7 W- L/ S# W
你看，卷起来以后下面还有一层，看来的确是密度大造成的了; ~. R! G5 P, c2 q$ o
但培养时密度也不必太稀，没关系
( E8 T' Q, [6 u9 l" B0 |; Z* i5 T. h( Q另外，可以铺明胶，是有作用的6 {. K8 Y4 P7 M" O5 ]# }1 w& m" \# r
你可以比较一下- Y$ _" p: V; c) V
状态在镜下就能看出来区别

ligangtiancai

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( G; C; ^3 N: e6 C# k8 J2 M& `! `  H6 O/ u( C
看样子像是密度太大的问题，不过我同学用的同一批细胞，只不过传代比我早了15个小时左右，他也是一传三，就没有出现这个问题。

zpzp0312

回复 ligangtiancai 的帖子! b7 D8 d/ E. R0 `. t5 o
9 S9 C, r2 D  H: E! _0 W
不用讨论了0 p0 p/ Y; o2 u4 _2 f
如果是用来养ES细胞。铺明胶，密度适当小一些
4 Y) o" O( ?6 a- ]毕竟卷边也就是偶发事件

genedu

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0 Y# [; v- T% e0 H$ \& Y1 n
5 I2 [% a9 g$ Z5 t, Z能活，不过状态就不会很好了，建议重新解冻。如果传代的话，会有口香糖状粘稠物，不易吹打开