求助，大家帮忙看下iPSC上的小圆点是什么？

ligangtiancai

回复 XIE冬D 的帖子+ u! a6 R, ]& s7 A, c
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请问你在使用胰酶消化的时候速度如何。我在用自己配的0.25%胰酶（+EDTA0.02%）和0.05%胰酶（+EDTA 0.02）以及PAA的0.25%胰酶，iPS的消化速度都非常快，20sec就都下来了。感觉是不是因为iPSC收到支原体或者什么的影响，状态不好，脱壁特别快。。。

XIE冬D

回复 ligangtiancai 的帖子* g0 c0 e8 l" k; E' [4 p7 l4 {7 S% X
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我用的胰酶是GIBCO的，不是自己配的，2分半时钟差不多就可以下来，但是还不是单个细胞。我觉得你的是消化太厉害了，或者自己配的消化强度大些？你们实验室其他人的也这样么？如果怀疑是支原体的话，可以定期取细胞培养液做一下支原体检测。

XIE冬D

回复 ligangtiancai 的帖子; j, w7 ?0 [$ _# A# T) Y

3 L# u0 x' f% S, k& _5 y; J0 V估计就是吹打太用力了，我师兄说细胞磕不死但是会被吹死，所以如果未成单个细胞可以终止消化，轻轻磕一下，另外，消化时间一定不能过长，如果不放心的话，可以镜下观察，我之前不能把握消化力度的时候就是这么干的。

ligangtiancai

回复 XIE冬D 的帖子5 t6 T9 U  v1 I9 P0 O6 \

& i/ @" |, g5 E$ Y我的iPS消化非常快，基本上加进去、过火封口、再镜下观察（合计小于30s），细胞就已经脱壁了，用了2种自己配的胰酶（+0.02EDTA）和一种PAA公司的胰酶（无EDTA）都是这种情况，而且是整个克隆都下来了，然后再吹打上20次左右基本就成单细胞了。。

ligangtiancai

回复 XIE冬D 的帖子9 p# W. @. }$ }6 }0 D4 m
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能给我说一下你使用的胰酶的货号么，谢谢！

ligangtiancai

回复 XIE冬D 的帖子
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6 x1 r  Q+ S) u/ ]5 z. M+ D是不是我的细胞已经受到什么影响导致贴壁能力下降、消化过快？

wolfgang

以我个人的经验，我觉得基本可以确定是支原体，楼主最好去做支原体检测，支原体阳性dapi染色可以看出细胞核和细胞外面都有雾状蓝色出现。黑点不是支原体聚集造成，而是细胞在应激状态下的代谢产物。支原体对于重编程和分化进程影响很大，造成实验根本没法做，我等深恶痛绝！

ligangtiancai

回复 wolfgang 的帖子9 d3 V" g3 d5 l7 n) n

7 j9 A# W3 Y! J# Z- v好的  我明白了 ，准备扔了，谢谢！

dilal

支原体肉眼不可见，细胞状态还行，饲养层感觉有些老化了，

184lj

收集细胞培养液，PCR检测一下，就知道是不是支原体污染了。