求助，hiPS诱导EB逐渐消散!

ligangtiancai

如题，我的hiPS在悬浮诱导EB后开始逐渐从边缘脱落，3天后基本上就全散开了，很是郁闷。。9 l* g% ]5 i8 u' Z3 R

8 Y5 V' C4 _$ U* Y9 X问题如下：7 t. T$ y( _+ z/ H. A/ p# X- |- u
     1 EB逐渐脱落散开的原因？7 U/ u& R: V$ ]5 B
     2 如果是支原体污染，如何检测和去除？
6 B9 [7 s6 o+ T9 i3 E   ! m: N4 `4 H4 n5 h# y2 c
                   谢谢！

bio-bin

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( r# K' R. |# U! G& U  J8 O) y' ~" y, o; `( ]! Y- D3 W* \
我也遇到同样的问题。我想请教一下，你用的EB培养液是什么?（DMEM/F12+20%K-SR+1%NEAA+1%Glu+2mM βME? 还是不用k-SR，加血清？)，另外你的hIPS形成EB前是维持在有饲养层上，还是在matrigel上？

ligangtiancai

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" Y, K2 n. B; l+ k4 `2 c) @
做EB时用的是MEF的培养基， 高糖DMEM80%（PAA）+FBS（PAA）+1%NEAA+1%L-Glu。EB是悬浮培养的，接种前去除MEF

jefferson

建议换二楼说的培养基试下，不过用FBS替换KSR，即DMEM/F12+20%FBS+1%NEAA+1%Glu+2mM βME，也就是EB20培基。5 `; `: E! h+ M& ^/ O- v; v

5 @* b! \) L4 Y( D另外，如果有支原体污染，直接丢吧，基本没办法去除的。即便加药，效果也不好。

ligangtiancai

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恩，我试下，请问你用的FBS是什么牌子的，是否是ES-qualified的？谢谢

jefferson

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4 `1 F7 T8 s9 a6 A' K3 w) c4 P0 J  w
GIBCO

echoxy1020

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5 E3 t9 g% B0 \) l' z. S! \
& A% X0 H$ `/ `7 m请问一下为什么建议用FBS替换KSR？有什么区别吗？

wangxiang

支原体检测可以用PCR的方法，清楚推荐sigma的BM-CYCLIN。如果不是重要细胞，建议就直接扔掉吧，杀的周期较长。