求教！关于小鼠iPS细胞EB培养的几个问题！

ligangtiancai

RT，本人准备做鼠iPS的悬滴法培养EB，有如下问题：
6 b( x& C  `1 n9 R" D9 t$ L1.用什么样的板比较合适（贴壁板/低粘附板）？8 U1 l3 C6 s5 J5 K( j* M6 O
2.接种在培养皿盖上的悬滴密度取多少？
5 p( R; b- e/ J: ^$ a0 e% Y9 X+ ]3.悬滴之间间隔多少？5 |3 q) B! @. r5 z
4.悬滴培养时间？期间是否需要换液？, F) Q7 W: W6 s& k
5.其他需要注意的地方？; z; C1 R3 X% @3 O4 ~& Q/ H
           先行谢过，谢谢！

mohanmud

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0 P; Z; L% z* w3 @% x* K# X% L5 l& h8 ~" z" s
1.用什么样的板比较合适（贴壁板/低粘附板）？
4 A! o4 e% O+ f1 \& [9 X6 Q, |都没关系。0 u0 I3 q+ v3 [
, }8 O) F, X6 `: W# ?  C% w2 y
2.接种在培养皿盖上的悬滴密度取多少？7 E. |0 Q2 _; q  C$ |
一般500个细胞左右每滴，15-20 ul 培养基+ `9 A  W( {( k! j  j
( V1 p1 l$ g% ^' y# n" C# q2 L
3.悬滴之间间隔多少9 ]9 q+ c0 z  P  U3 o
这个没固定要求，你操作时候只要两滴不会融合在一起就行了+ c; r0 J1 S. ^
0 _% E+ M6 ~1 t1 X0 {
4.悬滴培养时间？期间是否需要换液？  r0 P: z: @3 l( l# U
两天之后EB稳定了加入培养基混一起培养就行。
$ g0 W2 X# s" E# I* c% p1 _1 x
5.其他需要注意的地方
$ L0 F( D( k( y6 p) R可以试着suspension EB培养，方便多了，而且达到的效果和悬滴法差不多。  O3 V' `6 i! m8 c4 s; ~

刘森泉

做过的能给个详细的protocol吗？非常感谢！

shangchunhua

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4 X( q/ e( m- ]
# E3 ]9 n3 H; x, K提供两篇文献，楼主参考一下吧

ligangtiancai

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9 R5 C: X4 z; X& Y# u% b4 x8 F+ J7 i# L9 R4 M% D
谢谢，挺有帮助! 还有个问题，就是我想用25孔板做iPS的免疫荧光染色，不知没孔应该加多少的细胞量比较合适？谢谢

ligangtiancai

回复 shangchunhua 的帖子" V' t& _" R) O# G
% u1 w# r; |# i, l/ l
学习一下，太感谢了！

天龙八部

学习，感谢分享！