酶消化法 分离培养间充质！

帝国黑骑士

我用组织贴壁法，养间充质，想知道，酶消化法都怎么做的，效果如何！

xiaopingzeng318

1、准备好胰蛋白酶，浓度0.25%或0.125%均可；
( m( v( Q; L0 X! x  q. x2、胰酶消化细胞：弃去培养液，用生理盐水洗涤一次，加入适量胰酶消化。* M' H$ H" W3 M5 i( s* f
3、消化时间要自己摸索下，室温2-5分钟，中途可在镜下观察，大部分细胞变圆一半左右细胞漂浮时，既可终止，过久会使细胞损伤死亡等。用DMEM或者生理盐水终止消化，用管吹打瓶或皿，收集消化液，再用生理盐水洗涤一次收到剩余细胞。
) o0 q8 {7 v7 V' K2 D( J4、将消化液离心，一般1000rmp离心10min。! y# u; u: l& o& b9 y
4、离心后弃上清，加入原培养液重悬，吹匀，取10ul细胞进行细胞计数，继续传代或者其他实验

owenlion

你用什么组织做酶消化

owenlion

回复 xiaopingzeng318 的帖子$ x: ~( I; W, H2 b! S! H4 I
( q$ Z! {: R# ?$ Z5 g& b
应该针对不同组织选择不同的酶吧

帝国黑骑士

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- ]; F0 d; t+ H0 y8 M
5 J: f" i0 _: Q3 S3 t; x  O脐带间充质组织！

单个核细胞

回复 帝国黑骑士 的帖子3 O0 `* b( _, A5 I( P* z

' H( Q3 F( Y  Z论坛里搜一搜。( Q8 r8 K0 g: e6 v1 s
http://www.stemcell8.cn/search.p ... mp;searchsubmit=yes

xiaopingzeng318

回复 帝国黑骑士 的帖子5 @% l6 F: }& V% T+ [
1 x" [: s& g4 |5 ^. h+ C! _
脐带间充质可以用胰酶消化

xiaopingzeng318

不好意思，没说的很明白，原代的话用组织块培养，结果不错，没有用过酶，我说的酶是指后面传代的

owenlion

这个评分的不专业

owenlion

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, k& n# o! M: y+ g  `
1 i4 Q( w  D' F0 u, C5 Z5 I' y8 c酶消化有点难度，还是不做的好，组织块养的细胞还好点