急！急！急！急！CIK细胞实验中出现的问题？？？？

hwlightning

最近养CIK细胞，细胞总是贴壁，悬浮细胞也少，加入CD3和IL-2好像没起到作用，
' D$ v: \/ O; ^! r9 S$ R7 S一直贴壁，吹不下来。
& P1 u: }1 O# fCIK细胞不是悬浮的吗？为什么会还含有那么多贴壁细胞，如果贴壁细胞多，悬浮细胞就少，成团就会更少，和面再补加一支CD3也不起作用。
& X4 v  |7 o- ]% w) T" a+ A还有一种情况是细胞一直不会扩增，养着养着就会凋亡，细胞团也会凋亡，这会是什么原因？

ly200101042

我也遇见过这种情况 而且有时候细胞贴壁还变型了
$ ^/ \/ r8 q0 c- m! i6 B7 u1 K) _是不是细胞太多太挤了啊 有时候我要是分的细胞多 就会出现这种情况啊

hwlightning

回复 ly200101042 的帖子
# b, ?8 h, }5 W! _/ q2 c+ j* m# i  R: {0 b* B
CIK细胞应该是不贴壁的，也不会因为细胞多而变型，你分离的时候是不是红细胞很多，+ K0 C5 G9 Q  e# \! Q
想过怎么去除红细胞没？

ly200101042

我用过溶血素 但有时候嫌麻烦啊

woosheng

2 K1 c/ w  r& Z3 |5 B( _3 F$ S# b: G' b, D. F1 x6 C: W0 W
可能是单核细胞。PBMC里有除了淋巴细胞以外还包含有单核细胞。单核细胞容易贴壁，分化成DC和巨噬细胞。
+ |' x; B8 |/ E2 a& m加CD3抗体和IL-2是没有用的。

lyj-0017

回复 hwlightning 的帖子7 a3 i) R0 R/ l+ P0 u3 C8 C6 \  q
, ?$ a7 h' v5 P. P! R
你好，我们现在培养CIK液出现你说的这种情况。培养几天后，培养基颜色根本不怎么发生变化，培养液中也有絮状物，像是细胞成团，最后收集的数量非常少。你们现在这个问题找到原因了吗？是如何改善的呢？

ljl1988115

单核细胞比较多吧

meister

回复 lyj-0017 的帖子
) y% @; \  s% c& ?1 K" X( E8 c
! O' ]5 O1 ~- O细胞不长，出现许多絮状，是细胞死了！

lyj-0017

回复 meister 的帖子
/ H' [: L9 l5 H6 B/ V; A
$ z) `9 c- z; P. Z6 z; P那么，细胞为什么会自己死掉了呢？是细胞因子没起作用？还是因为营养不足呢？或者别的什么原因？

meister

回复 lyj-0017 的帖子
) o% P" k* V+ j; i7 S- Y2 R' E+ a7 ?( `
细胞会死掉，主要是两个原因， 一是培养基问题。 二是细胞密度过高。
% O: ~( G$ N4 u3 G2 z# _我估计你的是培养基有问题。看看IL-2是不是降解了。