脐带间充质干细胞的贴壁分离方法

xiaolong

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) g! {0 a5 `! o+ a, ^接种后，组织块有个贴壁的环节，贴壁效果好的，加培养液后，细胞会爬的很好，如果贴壁效果不好，组织块会漂在培养液里，细胞爬的效果很差，怎样能让组织块很好的贴壁？贴壁时间多久再加培养液会好些呢？

单个核细胞

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剥胶的时候，剥下来的华通胶直接放在50ml离心管内，全部剥完后剪碎，剪的过程中如果太黏，可以滴加少量PBS，不要滴太多。贴壁的时候用3ml吸管吸起组织，接种在培养瓶中。T75培养瓶每瓶贴20-25块，在培养箱中放置3-4小时后补加适量完全培养液。若是做的晚，可以第二天早上加液。以后观察的时候动作要轻盈，尽量不要使组织块漂起。7-10天后，会有细胞爬出，可以去掉组织块补加新鲜培养液继续培养，等到局部间充质干细胞密集的时候，可以传代。

xiaolong

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& f# m7 U- N! w; i
. b0 T% S4 A$ c, T# D- F/ i谢谢啊！

xiaolong

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8 I' l. y8 x; L, E  Y# a再问，“在培养箱中放置3-4小时后补加适量完全培养液。若是做的晚，可以第二天早上加液”，如果组织块在培养瓶中贴壁，组织块在培养瓶中裸露的时间太久了，是不是会影响组织细胞的活性？

单个核细胞

回复 xiaolong 的帖子& i- b$ w& H$ T) I+ @2 h, ?
0 O( m" f* C) P, w" V
过夜我做过多次，没发现对细胞活性有影响。你也可以这样，刚贴完壁在每个贴壁的组织块上滴加一滴完全培养液，保持湿润就行，放置的目的主要是让组织块贴壁牢固，加入培养液后不至于漂起来。

xiaolong

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再谢谢啦

Demon_CN

酶消化法比贴壁法细胞长的快，生产周期短，但是消化法技术要求高，消化时间掌握比较重要消化过度会伤细胞
2 O! i6 R# \% c1 e操作发杂一点，费用也要贵一点。
/ L" t# X1 m/ m9 L! {& P& r贴壁法，比较简单，但是周期长一点，我现在就用大概P1代冻存有10*7个细胞（养5个T75，传代一次）。缺点你懂的周期长。* ~! ?: k7 J3 G6 j$ }$ z

xuyang0317

个人觉得，贴壁法很好，速度经济，省钱省力省时，就是培养的时间要长点，爬片时注意不要污染，成功率是100%

xuyang0317

你可以先加5分之一的培养液，第二天再补上，没问题的，我做过！

hyf198675

回复 askage 的帖子' q3 b% I" K: _1 c7 X5 a* o
0 K* `  A* c1 S
你能不能和我说下你们的实验步骤啊？我正在做酶消化法培养间充干，但培养效果不好，拜托了！