成脂诱导

sarah19860420

最近诱导人的TENDON STEM CELL。成骨很容易就做出来了，为什么成脂还做不出来呢，不是说成脂也很好做的吗？大家在成脂方面有什么又到经验，希望大家分享下，帮我找出问题所在，谢谢啦。1 s% S/ N2 L1 Q" Y) U

0 y" p4 v6 Q* \, g5 C' N还有成软骨诱导，形成的pellet是应该悬浮在培养液中还是最终会贴壁的？

luoziwei

软骨诱导的pellet会粘在离心管底部，像换液的话直接倒培养液都不会倒出来的。你先染给我看看你的成脂肪分化培养基的配方

gact

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7 u: J& @1 O' Q/ i6 g我很想知道你的protocol。。

sarah19860420

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& j: O& _4 k' m. M' e
( G2 G+ K" Q. P1 Y8 v成脂,DMEM(L,因为我们这的一个老师说高汤低糖都没有太大影响，所以就选择了L)+10%FBS,4 d' l! Y/ H% F% w
1uM indomethasin, 0.5mM IBMX, 10-5M的dexamethasone , Insulin 5ug/ml.
! d& F/ X' ?/ l' w2 W8 @9 O; j在这诱导过程中，细胞也死的挺多的，但是并未完全死光。是不是地塞米松的浓度太高了，我看还有用10-4M的呢。所以应该没什么问题吧。
9 F( b9 p+ Q! ?2 d' }" c& R* v- }5 \( n5 v$ T1 b
还有就是软骨诱导形成pellet如果黏在壁上，那黏住的那一部分就不会形成软骨了，对吗？

sarah19860420

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% M0 q$ u8 [1 P9 [8 V+ J$ T& ~2 A你是说实验过程，还是实验配方。成脂的还是软骨的

luoziwei

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7 \2 ~9 J4 v' p/ h
2 ^) p% }, b5 T- M" W, z还是选择高糖吧，insulin加到10或者20，dexamethasone不算高，

luoziwei

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) x6 r" `: S4 b; S( [, I( ?  h9 h, M2 |) C2 x6 M: w5 J4 ]9 N. B
刚离心下来的细胞是一片沉在管底的，培养了3天后，片状的细胞会慢慢卷起来，形成球状，大概7天后，就开始分化了。你说的黏住的那部分，只是一小部分，就像一个球放在桌面上一样，因而我猜想它还是形成软骨的，但没去证实过。

gact

sarah19860420 发表于 2011-12-30 00:37 : I; ?* T) l/ g
回复 gact 的帖子0 p* \: J1 N* H5 \) }8 r
/ {7 x+ `0 Y/ ?. x4 v
你是说实验过程，还是实验配方。成脂的还是软骨的

0 I) r  H5 ], y! \
more is  better

sarah19860420

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* V6 a# R/ Y& A  l多谢耐心回答

sarah19860420

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  b" |: T6 ?7 B+ {! `! @! r! N6 I! g5 L
1.铺细胞，代细胞密度达到70-90%，加入分化液，之后每三天换一次液，培养21天后进行鉴定。
; ~8 b/ q+ q  v4 g2. PBS洗，10%福尔马林固定5min
( K7 s* s: J; z3. 水洗两次
/ q$ {" _2 I5 }3.Oil Red staning.2 X& G; c5 |% v1 U5 ~/ F( V9 u
4. 水洗几次。$ I, w# n  H% p" q6 o$ u, Q1 ?
5.OK了。