传代后贴壁细胞只有一半。为什么？

jss667795

我养的胚胎骨髓间充质干细胞，原代细胞长得挺好，传代之后总有一半细胞不贴壁。我用的是GIBCO的胰酶。稀释五倍使用的。消化时间一分半。10%FBS和培养液中和后，1500r/min离心5分钟去掉胰酶。然后重悬。传代比例1:3.2 Y2 [: j. f4 V7 F
请问我哪里出了问题呢？如果不贴壁，要不要去除不贴壁细胞呢？我总怕会对贴壁细胞有影响。因为贴壁的细胞长势和状态还很好的，

sunny2829

操作似乎没什么问题~~~
7 v1 j% d) D8 w+ N4 }& v; j, r可能是培养的细胞不是很纯，有一些悬浮的细胞，我建议还是去掉吧~~~

meister

1.原代细胞不纯。5 ~; b. n" z! ]2 i6 J+ l9 }8 Y; @
2.部分细胞贴壁能力较弱，非间充质干细胞，没有关系，如果传代后仍旧如此，估计胰酶消化有问题。
9 d- [/ |2 M( ]8 n) `6 e/ T9 }3.如果贴壁仍旧不好， 可以包被培养瓶

andylee824

胰酶的浓度调到10倍试试怎么样。2天还飘着的那些建议半换液撤掉。

干细胞狂想

你可以1000r，然后1传2，第二天换液，把不贴壁的洗掉~ 可能也是传代过程造成细胞损伤不贴壁啊~

liufutang

首先胰酶的浓度是不是过高了 这样的原代细胞最好胰酶的浓度要稀释。然后就是消化时间，在镜下观察时间不要过了，因为原代细胞比较杂 不同的细胞消化时间不同，最好多关注本身需要的细胞就可以。 上面有漂浮细胞只要贴壁细胞状态还好，尽早吸走扔掉。

493512112

1、有一些非间充质干细胞是不会贴壁的3 X. E0 i0 \( h! ^8 X
2、传代的过程中细胞损伤过重，可能是胰酶消化时间过长或者浓度过大的原因0 s& `# t; \8 m
3、一些老的细胞传代时胰酶消化后，会死去，你可以记下活力就知道了。

天枰2012

如果贴壁仍旧不好， 可以包被培养瓶

请问怎么包被培养瓶啊？谢谢

南宫燚岚

回复 天枰2012 的帖子9 \# B- X5 r' s9 K

; w* c7 D: f& _. U包被可以用多聚赖氨酸，但是可能会比较贵，像我们养MEF时就是用1%的gelatin溶液37度包被1h差不多

meister

回复 天枰2012 的帖子5 u2 F2 R' \" g; |+ s

% Y/ W# d7 r5 r" W不用多聚赖氨酸。
4 ~4 z/ D4 W7 n那个是做组化用的。
4 n7 Q1 N) A; q& ^/ \2 B9 Sgelatin， fibronectin, collagen, laminin等等均可。2 p6 |* ]% E+ j9 I0 d
gelatin最便宜