大家都是怎么用腺病毒转染干细胞啊

sannia

我的大体步骤是：
# S# {1 g; n* q: b& t2 ~6 O( R3 f3 r/ s. A2 C
用293X细胞做出病毒! ?3 \2 Z4 S# b, a
把病毒溶液直接加到比较小的干细胞克隆上 （2次）
6 [4 d- a2 C* A5 `2 w) d等细胞长满后，在分细胞，打成较小的克隆
3 a9 M! T5 M  u, R. ~然后用抗生素筛选阳性克隆
, _7 S( s# [% R& w) V- _3 H: Q0 @" v  }) u' Y2 t  t6 @
因为我用的是一个诱导表达系统，当我加入诱导剂后发现只有一小部分（10%）细胞表达了目标基因9 j# @' _9 Z0 \9 h1 T3 l. u- Z
但是所有的克隆都是抗性筛过的8 [0 V% M) m! E" A$ w; S6 ?

' g3 K3 r& s% `所以， 搞不清楚为什么效率很低
1 K% m. Y/ Y( Y* q* O( R+ P& D. A
希望高手指点！) T( }1 ]: g% V9 e8 L

$ F) b3 d2 i% P/ J

lvmanrong

我也想知道，大侠，高手在哪儿啊？

晴斗斗

还没做到这一步，前几步问题就很多

三木一叶

有10％就知足吧，哈哈，我是转进去，一点迹象都没有呢

tlms1991

感觉是腺病毒滴度不够。腺病毒是瞬时转染，我的理解是转进细胞后目的基因不会随细胞传代，所以病毒数量要足。