ips分化

sizhengliu

新手请教各位一个问题：我想诱导体细胞成ips，然后再向特定方向分化，我需要选择哪种诱导方式（慢病毒、腺病毒、mRNA···）更为可行？哪位前辈有这些方式的比较资料？多谢！

sizhengliu

可以分享自己的资料吗？自己顶··

刘森泉

小鼠iPS重编程（逆转录）* Q4 W; K+ i$ Z
' Z' R; [+ R& l
1.        ①4份293T细胞，80%，10ml培养基；
  [6 O; f1 w5 e. @, e( D& w②复苏一株2代MEF；, a( s: i% j  k6 _' L: |: G5 g8 p
2.        ①半量换液，培养1h；
$ m% f" ?  l/ T) J1 G②4份病毒：因子15ug、GP15ug、G4ug、TE（437-V）、CaCl263ul、2XHBS500ul，0.5h后加入293T细胞；+ I# j) Q* k1 `
③用0.1%明胶处理一块六孔板，2个孔；
/ ?* C/ _2 i) \$ U④6h后换成5ml新鲜293T培养基，加50ul sodium butyrate；
/ J! c0 l' m- m( C" U7 y3.        ①六孔板明胶孔用D-PBS洗3次；  I) ]! a. n9 D6 g
②MEF转移到明胶处理的孔里，准备转染；' M* x, Z3 O* C7 I  p
4.        每盘收1.5ml病毒（其余继续培养），混合后过滤，加4ml至MEF中，再加4ul polybrene，6h后换新鲜MEF培养基；, P* D& {/ E( v% @' @- a' B
5.        收集其余病毒混合过滤添加，再加4ul polybrene，6h后换新鲜MEF培养基，新鲜培养基中加VC和VPA（2uM）；( o+ z% h/ t$ q, t2 C+ a
6.        mitomycin C-7ug/ml处理基质细胞2h，D-PBS洗4次，将转然后的MEF转移至基质细胞上。换mES培养基，加VC和VPA；
2 E3 a, o! ^3 M( h' m7.        每天换液。
0 @$ Q9 p' Q" K' n+ s

刘森泉

你做什么方面的分化啊？要人的还是小鼠的iPS，上面的protocol仅作参考，希望可以帮到你。