小鼠骨髓间充质干细胞

qingtinglueshui

     1.最近一段时间都在养小鼠骨髓间充质干细胞，取原代11后消化传代，消化了快50分钟都消化不下来。把消化后的细胞离心后，离心管中基本没得细胞，不知道怎么回事呀？有哪位战友知道啊？
0 [2 W9 m7 B  a1 z( o* E- q8 r  d   2.上次将培养了8天的原代细胞消化后，今天再进行消化传第二代，和上述情况一样，难消化，消化离心后没有细胞，不知道怎么回事呀？

xintianaric

我之前养了原代的骨髓间充质干细胞，养了几乎半个月都没见它们长满，然后进行消化，谁知道消化了几乎一个小时都没有把贴壁的细胞消化下来，最后是终止消化后加培养基硬吹打，谁知道到最后一个细胞也找不到了……这个又是什么原因呢？

不苦的药

你用的胰酶浓度是多少?
4 t7 q/ v( E: x- G1 I9 G# e; a2 @含不含EDTA?7 K& w. o; g- {2 o: J
你可以放到培养箱孵育一下，你可以试一下4 ]( w- ?" K  F% U0 X
7 y5 G) n1 }- V2 b& B

qingtinglueshui

回复 不苦的药 的帖子
; x  e9 j% |$ @9 T3 S
7 |9 k  N, ~# ~5 I7 @  d1 g2 B9 E6 ?$ U: T用的0.25%胰酶含0.02%的EDTA，是我自己配的，不知道是不是这个原因？可是我用别人很好的胰酶，也是不好消化啊，不知道怎么回事？

lzy198

我问问师兄 再回答你

iceyang

第一胰酶一定要37度水浴好了之后再进行消化
( ]" {4 F5 }# R其次如果实在不好消化，可以使用细胞刮子把细胞刮下来，刮的时候动作要轻柔一点

zarecol

       骨髓间充质干细胞是属于较为难消化一点的贴壁细胞，消化时发现不容易离壁的话，你可以使用一些常用的物理手段辅助消化，比如摇晃，轻敲，实在不行，可以采用细胞刮刀。

qingtinglueshui

回复 zarecol 的帖子6 w" e5 @5 y: J  o. E# F/ [

/ N6 |) ?5 G4 `# E" h; {, h摇晃，轻敲我都试过了。我问了实验室的老师，他说用细胞刮刀的话对细胞损伤很大，而且我是种到培养瓶中的，不好操作啊。

liluli0715

加胰酶后，在显微镜条件下看到细胞变园后，就用手拍瓶子，大概一两分钟后细胞就全脱了。

漂泊的风

不应该这么难消化啊，我以前做的时候很好消化的，你可以加了胰酶后把培养瓶放到培养箱里，37度有助于增强胰酶的消化作用，估计十几分钟应该可以消化下来。