细胞周期测定中的细胞碎片

wangzhiqi86

我最近在做细胞周期的测定，但是由于我的细胞是重悬在水凝胶当中，不知道是回收问题还是本来就是这样，在流式图给出之后，发现细胞碎片很多，有的甚至会达到50%多，不知道这样得到的G1、G2和S期的数据还是否真实，也就是说它是否能反映出细胞的真实情况？先谢谢各位了！

leisong12

流式不是能够通过设门排除细胞碎片的干扰么？怎么还会有这样的问题，除非你的细胞太散了，根本找不到要分析的细胞主群，那样也就无法测周期的数据了，否则应该可以的。

wangzhiqi86

回复 leisong12 的帖子" F2 W# R4 ^. I" ?8 a

" s: {( c! y1 l( p) s# ~我把样送到老师那里的时候，专门问了能不能排除细胞碎片的影响，她说做不到。关键是，我现在拿到手的数据是不是反映了细胞的真实情况？碎片对最终结果影响大吗？

leisong12

一来如果你有图的话，可能我们能帮你判断一下；另外排除碎片本就是流式分析过程中的必要步骤之一，怎么说做不到，我不理解。

wangzhiqi86

回复 leisong12 的帖子7 g6 B) C. z& _& z* H  ~  _  D9 z  f

- C9 E- O. [: m" Q' n. |* _细胞碎片达到50%以上，能帮忙分析一下吗？非常感谢！

hany2007

第一，考虑是否细胞消化过度。
( ?9 O+ p& P8 T2 d' X4 `2 n第二，考虑收集细胞时是否吹打过度
6 D( x1 b. B' _第三，考虑离心收集细胞时转速是否过高

wangzhiqi86

回复 hany2007 的帖子% @- L9 Q2 C/ b8 J& ?2 A: z& N; R
. }9 h. k. O' ]2 ]% C. K( t4 }
非常感谢，那我把转速降一降，之前离心转速有4000rpm，应该就是这个原因了

zxcv12345

回复 wangzhiqi86 的帖子5 b6 g& o' N2 g- b

2 m! b, S/ j6 Q800转离心对细胞来说已经足够了

hany2007

转速最高不要超过1500rpm，我一般用800rpm，3分钟。6 L4 K; X4 z/ _- G; G
关键是看你未处理的对照组，若是对照组也出现大量的细胞碎片，那么就是你的操作有问题。

leisong12

从FSC－SSC散点图可以看个大概，另外离心速度4000rpm显然太大，离心速度以rfc确定比较好，大概200g*5分钟就可以了，毕竟各实验室离心机型号不一样，说角速度不太可靠。