警惕支原体污染

hany2007

这些日子，我把所有的实验都停下来了，把实验室孵箱里的细胞统统都扔掉了，重新从液氮罐里把细胞复苏，用支原体专杀药物PLASMOCIN处理。; F, U1 |1 q% t
其实是不得已，真地不得已。我们这个城市里几乎所有实验室的细胞里都有一种小颗粒物质，细胞传代时一旦密度传低，细胞就不容易长起来。我一直很得意自己的细胞状态很好，嘿嘿，培养基都是清澈的。但等到国庆节，我就无法乐观起来了，我用PLKO.1做RNA干扰，转染完毕后，我用puromycin筛选稳转株时，从1ug到8ug的筛选浓度都把细胞给杀死了，puromycin我在五月份专门测过筛选浓度，merck的产品，很强，4ug每毫升就能把未作转染的细胞全部杀死，但低于2ug就无效了。而此次转染后，细胞在1ug就死光了，细胞培养瓶里漂浮着许多黑色的团块物质，里面充斥着小颗粒。
# S; T) W( @3 g# n我是很想凑乎下去，就这么个实验条件，我已经尽力而为了，老板急着要文章，我也急着要滚蛋。但如果就用这种细胞做下去，即便我不想造假，实际上就是在造假。支原体污染后，信号通路混乱，得出的结果就是似是而非的东东。
! N( D# Y  [, M( e临渊羡鱼，还是退而结网，这是个问题，斟酌再三后，我决定用plasmocin处理。当然细胞重新购买是上上策，但是中科院上海库还是协和库里的细胞，买来就是买一送一，没给你送真菌就是万幸喽！ATCC的细胞株国内引进是七千元一株，我需要8株细胞，老板要么自杀，要么杀了我，这是天堂鸟，我够不着。plasmocin很贵，50毫克打折下来是1500元人民币，能配两升完全培养基。连续处理2周，每隔两天换液，我用的是T75的瓶子，每次25毫升，成本算下来比抗体还贵，因为抗体至少可以回收重复使用。/ X+ L5 b& I! ]! J  W' {; u/ }6 }
处理后，我的感觉是日日惊心。具体表现是：1.原本清澈的培养基里漂浮出一些黑色的团块，随污染程度不等而大小多少不等。2.细胞形态发生了惊人的变化，原本细长梭性的细胞变成了上皮样，原本结片聚团的细胞开始分散成单克隆样。我发现处理后细胞形态逐渐能与ATCC和文献上的图片一致了。很可惜，我们实验室没有显微照相设备，我只能用文字来描述了。
. p- W( v  i3 ~* R8 f# `( H处理两周后，我有做了转染，puromycin在4ug每毫升的浓度下筛选出了稳转株，实验终于可以继续下去了！" F1 e# u0 L& T) ]$ g) L
许多时候，我都在想有多少爱可以重来，国内库里的细胞大多都是支原体污染，大家都在做着似是而非的东西，老板们梦想着骑着自行车登月，良心与良知，泯灭在这些乌烟瘴气里。现而今我甚少佩服海归或老外，就我这条件，你TMD的做实验试试。

yxc

谢谢楼主详细的描述与经验之谈！) U7 _1 N9 ^0 d  Z3 w8 c% O/ I5 w
我们能做的，其实最主要的还是要无菌，养好细胞的关键就是无菌意识，这是细胞实验的关键、基础。灭菌这一关可含糊不得。

流泪的鱼

我认为：第一，支原体是使细胞生长速度变得缓慢甚至死亡，但是支原体不结成团块。
7 J/ g" Z- x4 p3 q  u              第二，你确定你细胞所污染的是支原体吗？细菌、霉菌？. |: {& ~' Y, [. ~2 W
              第三，有些特殊培养基是抗支原体的。国内国产的药物也可以抗支原体，不贵。% O  t! ]- o6 j% Y) p
            

a86856635

张经验了

鹭岛之滨

额，没看明白怎么回事。我们实验室每次污染，是什么污染一点定论都没有，唉 ，是该好好学习

panyanfei

支原体？用什么方法检测确定了吗？

lele

谢谢楼主跟我们分享经验。
% x" R& z3 _: g做实验最关键的还是要有严谨的科学态度和不懈的精神。

懵懂干细胞

我悲剧了！ 昨天检测了一下我的三种细胞，结果最重要的一种有支原体污染！7 V0 A/ J1 A6 K* P! w
悲剧了！做出来可要个把月的时间啊！

翅膀111

我有一段时间也遇到这样的问题，细胞生长缓慢，培养基偏紫色，瓶底有一些沙子样的沉积，细胞逐渐死亡，没怎么检查，停了一段时间，把细胞室内仔细处理，培养箱严格消毒后才好点。实验室人多的时候尤其要注意控制环境啊，一不小心就前功尽弃了。

have-a-rest

要去除环境污染，似乎要甲醛熏蒸，细胞的话，污染的最好丢弃。不得已可以用plasmin处理。