请教下关于老鼠ES细胞培养

iamxuchen

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这是培养的ES细胞一传二后的第二天的照片，感觉比较小5 T$ o; U' q' e/ U. P$ x

" Z( B5 Y3 W0 |这是第三天的ap染色情况，因为第一次做这个不是很有经验，想问下这个情况是大部分都分化了吗？  h% g9 {8 Q& i+ _% L( B+ ]

, b0 ~+ g- n! i2 j这是另外一瓶的情况染色明显比前面那瓶深，但形态也不是很好，这跟染色有关系还是细胞本身的问题？

zhusealin

mES传代的时候要消化成单个细胞，不然就会分化

牙牙丫丫123

看照片感觉有一些细胞好像分化了……而且第二张AP染色的图片显示好像在显色后你没怎么洗干净……所以在饲养层上都有一些淡淡地紫色

iamxuchen

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牙牙丫丫123 发表于 2011-10-23 15:21
+ ~$ T6 U& |6 ?! K$ k' `5 c$ j看照片感觉有一些细胞好像分化了……而且第二张AP染色的图片显示好像在显色后你没怎么洗干净……所以在饲养 ...

/ r, u7 H! h4 M( T& f) a6 @1 Y+ Z# G4 e5 [3 H, C
谢谢，这又是一张照相机拍下来的第一张AP染色那瓶的细胞，染上色的不多，感觉分化了基本，主要还是要把细胞传代时吹成单个哦？mef的密度有什么要求不？长的太满会不会影响啊，AP在干细胞染色的原理是什么啊？为什么会出现一个细胞染色集中在一边？谢谢~偶比较新手

牙牙丫丫123

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1 y5 u/ k, z, C1 D8 M3 c# ?7 I
$ v/ u- ]* _" S2 J7 Q* @8 `1 w我不太清楚你用的是哪个公司的试剂盒，有一些试剂盒是需要过夜染色的。
3 O, L: n8 A' n0 h: M1 g6 V传代时是否消化成单个细胞这一说法有很多人都不一致，这主要看你们一直用什么方法培养，说消化成单个细胞是因为mES可以支持消化成单细胞的传代方法。
* w* }$ H0 f. g" P& [1 r) v) e# d( hFeeder的密度不要太大，太大了不利于ES的生长。+ V! p: F6 s* z6 d, U. J
而且ES传代时机要把握好，不要等ES长的太大了在传代，这样容易引起分化。* F9 K" T9 ?7 `& ^( d! b
AP染色的原理是：细胞胞浆中的碱性磷酸酶在pH9.0－9.8缓冲液中，能水解磷酸萘酚钠产生α萘酚，后者与一种稳定的偶氮盐偶联染液，沉着与细胞浆中。
" B0 P% m, G1 _染色的时候着色细胞集中在一边有两种可能性：1、这些细胞没有洗干净2、克隆中仅有一部分细胞分化了，其余的细胞还没有分化，所以呈AP阳性

subenjinwo

朋友，请问这是什么细胞？

iamxuchen

回复 牙牙丫丫123 的帖子2 L) g0 q2 b7 H" L8 ^8 P

1 P4 }6 K$ T* Z! M$ R谢谢！学习到了

llecstem

回复 牙牙丫丫123 的帖子8 w$ _2 q0 k# o' Y# C- r: H

. f: ]4 M3 q' D' L. L8 S) j你好，请教一下，mES细胞的单克隆生长的很立体，边缘也很清晰，是不是应该就是没有分化？边缘出现了泡状的细胞同时扁平了就是分化了吧？谢谢！