简易快捷的干细胞在体内分布测量办法

皮搋子

最近打算做一下Bmsc注射小鼠后，观察注射的bmsc在小鼠体内的分布状况，看文献有印度墨水等办法，但均比较麻烦。8 L# K- w$ o# |" z3 |# Z, g

( K4 b, {  W4 W! v, s" Y有人给我建议说，你用慢病毒携带荧光定量标记物转染后注射小鼠，而后将小鼠心脏、肝脏等组织分开后破碎细胞提取DNA，然后荧光定量检测不就成了？: E& c, P. e" i" Q4 f3 j% ?0 P/ C

. }* x. A) J* @# [, G7 ~/ k粗粗一看是挺方便，但是仔细考虑后，干细胞在体内的量与正常组织相比肯定很少，需要PCR扩增不？得出的值如何还原成细胞数？
0 F, l. f! I( b/ w' R# t
- V0 K; |" S" t& t2 o各位大大谁有好的建议和看法，请不吝指教。7 w3 p; l; z' ]+ j4 @
$ u8 D) |) b9 K# e; A
或者各位将自己的方法写下，把这个帖子变成一个测量技术集成帖。

wangyashuai

我想可不可以用带报告基因的载体转染后注射小鼠，移植后每隔一段时间留取组织,通过观察报告基因产物在小鼠组织中的含量，确定bmsc在小鼠体内的分布状况。

皮搋子

依然很麻烦啊，做荧光定量PCR先要设计引物，然后跑PCR，200个样品需要4个月呢、

evial

用GFP蛋白来做不行么？

gqs2872022

用慢病毒携带荧光定量标记物转染后注射小鼠，6 y' j  o) v; f
然后用小动物活体成像仪进行动态检测不就行了，" }( ]! w. V, G
这样也不用去杀小鼠这么麻烦，还能动态的检测到  L# a$ V, e. c' Q3 }
动物体内大致表达分布情况以及随时间递增或递减情况。$ Q6 V& ^- V4 l. H8 z9 l
到最后才杀小鼠，该PCR什么的就怎么做。。。

皮搋子

问题是没有活体成像仪啊

flyingpnmc

回复 皮搋子 的帖子
6 X' f' Z( t0 c2 u% J: n3 D+ S) t( A8 |% _2 ^
没有仪器可以自己想办法啊，国内那么多单位都有，自己联系，两个方案：一个是花钱；第二是合作。

hwlightning

我用的是荧光染料CM-DIL标记的细胞，然后尾静脉注射到裸鼠体内
, L3 O& v/ n  o+ y+ c0 `3 W/ |也是用的小动物活体成像仪（广州南方医科大学）开机费200，一小时200。最好是自己带上麻醉剂。
; F6 a$ X+ X3 O% `+ W还可以进行小动物活体灌注，取组织进行病理切片。

dragon513

我知道的两种途径：
8 A! Q, K. k! t3 I# s1. 通过病毒转染使细胞高表达荧光素酶报告基因，用小动物成像仪检测，活动物即可活体检测。$ C3 t% m9 o- N
2.  细胞用造影剂标记后移植入动物后MRI检测。( l) C* ]1 E: P. C# i" V  l
两种方法都是活体动态的检测，对动物是无创的，同一动物可以作不同时间点连续观察。MRI效果更好。